一文详述：CAR-T生产全流程解决方案梳理( 五 )

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▲CAR-T生产的多种途径（图片来源：UCL） CAR-T细胞的扩增环节还可以从培养基的使用上去优化。传统的人血清培养基价格昂贵、批间差异大、检测难，并且可能包含新出现的感染问题，以及可能对T细胞扩增和存活有害的物质。无血清培养基是一个很好的选择，用来源和化学成分非常清晰的原料，代替血清为宿主细胞提供营养，可以降低被外源物质污染的风险。成本方面，采用血清代替物培养的细胞，其繁殖能力和生长能力等参数能够达到与血清培养的细胞相当，但成本降低了很多。赛默飞的细胞培养基和试剂能够最大程度地减少污染和变异的风险，同时提供大量的可追溯性文档（包括FDA药物主文件和法规支持文件）用于监管审查，从而促进从研究到商业化的无缝过渡。此外，赛默飞设计了具有灵活性和适应性的生物工艺容器，以便满足适用于封闭式系统的培养基和试剂的需求。
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▲ Gibco? CTS? AIM V? 无血清培养基04
质量监控
目前，细胞治疗产品的质量控制分为四个大的方面，分别为安全性、纯度、效力以及均一性，这些质量控制会贯穿CAR-T生产的各个阶段。安全性除了常规的内毒素、支原体及无菌外，如果采用病毒载体进行转导，还需保证病毒的高质量，避免存在RCR/RCL、低风险的整合特征等风险。CAR-T的效价主要指T细胞的激活程度，由于T细胞的激活涉及一系列的细胞因子以及癌细胞的杀伤，因而真实效价往往难以获得。通常会选取有代表性的指标，如IFN-γ的表达，来评估T细胞的激活。CAR-T的均一性和纯度则要对不同的细胞表面标志物进行检测，包括CAR-T细胞中的非目标细胞成份和杂质并限定其比例，包括NK细胞等；以及用于鉴别CAR-T细胞中目标T细胞的比例，例如%CD3+T细胞等。
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▲ CAR-T放行检验示例（图片来源：Cytotherapy） CAR-T细胞的有效扩增和较长时间的体内存活是肿瘤治疗有效的先决条件。监控CAR-T的细胞增殖活性，让治疗持续性发挥效能。接着是CAR-T细胞的杀伤活性评估， CAR-T专一杀瘤效力也是CAR-T治疗关键的一环。除此之外，不容忽视的是治疗过程中可能引发的细胞因子风暴等免疫反应，常用的评估方式为流式细胞术与显微成像技术，和细胞因子等蛋白分析产品。Invitrogen Attune NxT是一款高度智能化的流式细胞分析仪，具有专利声波聚焦技术、专业防堵塞、稀有细胞超灵敏高通量分析、顶级平顶光斑激光器等优势，其配置可达4激光16参数，并且可配备流式自动化工作站，实现24小时无人值守自动上样。