专家论坛｜尹明：HBV感染的动物模型研究进展

HBV是一种嗜肝的DNA病毒，会引起人类急性或慢性肝炎。慢性乙型肝炎(CHB)是导致肝纤维化、肝硬化和肝癌的重要原因[1]1965年， Blumberg等[2]在澳大利亚土著人检测到HBsAg ，称为“澳大利亚抗原” 。 1970年， Dane等[3]通过电镜检测到HBV完整的病毒颗粒，称为“丹氏颗粒” 。 HBV有严格的种属特异性，它的自然宿主限制在人类和非人灵长类动物身上，包括黑猩猩(chimpanzees)、大猩猩(gorillas)、长臂猿(gibbons)和猩猩(orangutans) 。这些非人灵长类动物的研究，受到伦理和饲养等限制，只有很少的实验室有条件开展，并且黑猩猩在欧洲已被禁止用于实验研究[4] 。直到2012年，李文辉团队[5]发现HBV感染肝细胞的关键受体，是钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)；稳定表达人NTCP的HepG2细胞系(HepG2-NTCP ，自然状态下HepG2不能感染HBV)可以感染HBV 。 2016年， Lempp等[6]发现，小鼠肝细胞转入人NTCP后可以支持HBV的进入，但不能转录、翻译和形成共价闭合环状DNA(cccDNA) 。 2017年， Lempp等[7]将食蟹猴、恒河猴和猪的肝细胞表达hNTCP ，这些细胞变得HBV易感，效率与人肝细胞相当。以上研究表明，不同物种间的差异，如肝细胞的结构、微环境和(共)受体，或者血液中的可溶性因子，影响了HBV的易感性和感染效率。这也从侧面表明， HBV侵入、修复、cccDNA形成(非必须)、转录、复制、组装、释放、慢性感染和再复发机制的复杂性，特别是还未弄清楚造成物种间差异的原因，需要进行更深入的基础研究。目前CHB抗病毒治疗通过口服核苷(酸)类似物(NUCs)可抑制HBV复制，安全性高，但很少发生HBsAg清除及血清学转换，停药无期；只能在不到10%的CHB患者中实现“功能性治愈” 。皮下注射聚乙二醇干扰素α(PEG-IFNα)可使10%~30%的患者清除HBeAg ，并发生HBsAg血清学转换，兼具免疫调节特性；但耐受性差，存在不良反应[8] 。在研的抗HBV药物或者疗法分为两类：(1)抑制或者沉默病毒的复制，如HBV进入抑制剂、cccDNA及其转录活性抑制剂、基因表达抑制剂、核衣壳组装和pgRNA包装抑制剂、HBsAg分泌抑制剂、RNAi和Crispr/Cas技术敲除等；(2)激活或者诱导免疫反应，如免疫调节剂、干扰素、Toll样(病原体识别受体)受体激动剂、免疫检查点调节剂、治疗性疫苗和改造HBV特异性T淋巴细胞等[8-9] 。理想的临床前动物模型既需要模型中有较高的HBV病毒含量，也需要相应的免疫环境。遗憾的是，至今还没有建立一个有效的模型，能够真实地再现HBV感染的免疫和发病机制。由于鸭子、土拨鼠和树鼩是非标准化的实验动物[4] ，而hNTCP转基因的食蟹猴、恒河猴和猪等模型还没有成功的报道，本文主要综述小鼠HBV模型的最新进展(表 1) ，为临床前HBV药效实验和HBV相关研究提供参考。