技术|单克隆抗体制备方法的前世今生( 二 )

随着我们对抗体结构、功能和序列多样性研究的不断深入，除了原有的抗体库外，一种新的合成抗体库技术也在不断发展。例如， HuCAL&Ylanthia文库中，为了使筛选出的人源抗体能更好的进行分子识别，将精确设计的序列插入抗原结合位点，并优化设计多种可变重链、轻链框架区域 [7-10] 。随着文库设计和筛选方法的不断进步，合成抗体文库将成为快速生产具有高特异性和高亲和力单克隆抗体不可或缺的工具。
人源抗体转基因小鼠
1985年， Alt等人首次提出将人抗体基因引入小鼠种系并使用转基因小鼠中产生人抗体的想法 [11,12] 。随着基因编辑技术的进步，使用人源抗体转基因小鼠生产人源化抗体已不再是天方夜谭。与其他技术相比，使用人源抗体转基因小鼠有许多优势，如无需人源化、具有更多的生物多样性，且由于体内成熟具有天然的亲和力。但是，人免疫球蛋白体量庞大对转基因小鼠抗体生产是一个巨大的挑战。为了克服这些困难，研究人员们通过使用不同策略已成功地获得转基因动物表达的人源抗体库，如全人源抗体小鼠和嵌合人源抗体小鼠等。
单B细胞抗体技术
虽然杂交瘤技术和噬菌体展示技术已经在单克隆抗体生产中广泛应用，但它们依然存在较难克服的缺点制约着抗体生产过程。近些年，为了克服杂交瘤技术细胞融合效率低，噬菌体展示技术导致重链、轻链的天然同源配对丢失等问题，单B细胞抗体技术正被逐步开发和应用。
简单来说，单B细胞抗体技术包含以下几个步骤：
a.从外周血或免疫器官中初步提取淋巴细胞；
b.使用磁性活化细胞分选（MACS）或荧光活化细胞分选（FACS）技术鉴定和分离出特定的B细胞；
c.将分离出的B细胞进行单细胞培养；
d.使用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和抗体特异性引物鉴定单B细胞分泌抗体的特异性；
e.扩增特异抗体基因；
f.将抗体基因克隆到表达载体中，并在细菌或细胞系统中表达；
g.纯化表达产生的抗体，并用ELISA等方法进行评估。
单B细胞抗体技术现在已广泛用于人和小鼠单克隆抗体生产，如一些治疗性中和单抗，可用于治疗多种疾病，包括癌症、自身免疫性疾病和传染性疾病亡[13,14] 。

本文插图

参考文献
[1] Zheng-Gui, T. A. O., et al. "Effects of silencing Sema4D on the growth, autophagy and epithelial-mesenchymal transformation of gastric cancer cells SGC-7901." Medical Journal of Chinese People's Liberation Army 46.1 (2021): 11-17.
[1]. Raybould TJ, Takahashi M. Production of stable rabbit-mouse hybridomas that secrete rabbit mAb of defined specificity. Science (1988) 240:1788–90. doi:10.1126/science.3289119