[环境污染]临床生化检测系统携带污染的分析与处理策略( 二 )
3.反应产物的影响:上一个试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰 , 下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果 。 当上一反应产物为H2O2时 , 则对以Trinder反应产生颜色的测定结果造成干扰 , 如UA对CHOL结果的影响 , CHOL对CREA(酶法)测定结果的影响 , GLU(氧化酶法)对CREA测定结果的影响 。 CK(NAC法)、CK-MB(NAC法)试剂中含有GLU成分 , 其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶(HK)反应过程 , 因此可能对GLU的测定带来干扰 , 尤其对GLU的HK法测定可能带来严重干扰 。
4.影响反应条件:上一试剂缓冲液成分改变了下一反应的pH环境 , 从而改变反应速率 。 例如:TP(双缩脲法)测定需在pH8~9时 , 蛋白肽键才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应 , 若pH<8 , 则会导致TP结果偏低 , 还直接影响球蛋白、白蛋白/ 球蛋白结果;酶活性测定有最适pH , 大多数酶反应pH在6.0~7.5之间 , ALP、GGT、LDH则在碱性条件下最适宜;CREA(苦味酸速率法)反应条件为碱性 , 果糖胺(动力学法)反应条件为酸性 , 受到污染后反应速率会减慢 。 CREA(酶法)试剂中含有抗坏血酸氧化酶 , 影响了氧化还原反应的进程 , 会对TBA(酶循环法)测定结果有影响;D-Bil(钒酸盐氧化法)试剂中的酒石酸盐缓冲液会影响ALT活性 , 对测定结果有负干扰 。
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三、携带污染的途径 1.试剂针污染:一般高速全自动生化分析仪都采用双试剂针 , 即所有项目的第一试剂都共用试剂针R1 , 所有项目的第二试剂都共用试剂针R2 。 试剂针R1或R2在每吸取一次试剂后都会进行一次清洗 , 之后会立即吸取下一个项目的试剂 。 如果仪器清洗能力下降或没有定期进行维护 , 试剂针在吸取试剂时会将部分残留的前一项目试剂成分带入到后一项目反应杯中 , 对后一项目检测结果造成影响 。 从各个项目设置的参数可知 , 试剂体积量远大于样本体积量 , 因此试剂针携带污染影响程度会高于样本针携带污染 。
2.搅拌棒污染:试剂与样本、第一试剂与第二试剂的混匀需要搅拌棒 , 而搅拌棒如果清洗不完全或黏附力增加时 , 残留试剂可能会对下一检测结果造成影响 。
3.比色杯污染:生化分析仪的比色杯大体分为两种 , 一种是循环使用的(如石英比色杯等) , 另一种是需要定期更换的(如塑料比色杯等) , 每个比色杯检测完毕后 , 进行自动清洗 , 然后继续下一个检测项目的检测 。 当由于各种原因导致某个比色杯清洗不完全或该比色杯老化时 , 吸附在比色杯上的上一个项目的残留试剂或者反应物可能会对在这个比色杯中进行的下一个项目的检测结果造成影响 。 根据经验 , 比色杯的污染对结果影响最大 , 因为比色杯最难以清洗干净 , 且在实际工作中难以判断在该比色杯中检测的前后测试项目 。
4.样本针污染:目前大多数全自动生化分析仪采用注射器或定量泵产生负压 , 通过样本针吸取样本 , 吸样后通过一定压力的清洗水清洁样本针 。 当样本针在清洗不完全或黏附力增加时 , 样本残留可能会对下一相邻样本的检测结果造成影响 。
5.清洗系统:目前大多数全自动生化分析仪采用多阶清洗剂和清洗水清洁比色杯 , 当清洗针或干燥针上有试剂、样本或反应物残留 , 可能会对下一个被清洗比色杯的测定结果造成影响 , 一般来说清洗系统带来的携带污染很少 , 可以忽略 。
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四、配套检测系统解决携带污染之道 1.从机理上尽可能去除污染之源:TC试剂配方中一般含有一种物料(具有提高试剂稳定性和抗脂血干扰的作用)是TBA的检测底物;而TBA是循环酶法试剂 , 可将底物信号循环放大(图1) , 因此只要有微量的底物残留 , 就会对结果产生很大影响 , 并且从反应曲线上无法看出是否存在污染 。 深圳迈瑞公司的TC项目试剂盒 , 通过优化配方 , 从根本上解决了交叉污染问题 。
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