使用非病毒方法生产 CAR-T 细胞( 六 )

与针对血液恶性肿瘤细胞的 CAR T 细胞相比，针对实体瘤细胞的 CAR T 细胞的生存能力和效力在侵袭性肿瘤微环境附近受到影响。为了克服这种抑制，可以用所谓的反向细胞因子受体 (ICR) 修饰 CAR 。在 ICR内，白细胞介素 4 (IL-4) 受体与 IL-7 受体融合。这种融合受体能够将调节性 IL-4 信号转变成 IL-7 信号，并最终增强肿瘤微环境中 CAR 的特性 [89] 。补充IL-4 的培养基可以提高 CAR T 细胞的肿瘤杀伤能力[90] 。
cGMP 的当前趋势倾向于避免在培养过程中使用任何动物源性成分。对无异种培养的强调引起了对培养基成分的关注。常用的动物源性成分，如胎牛血清 (FBS) ，优选被无异种替代品替代。最近有报道称，用人血小板裂解物替代 FBS 对 CAR T 细胞状况有积极影响 [91] 。
3.2. T 细胞表征
除了不同 CAR 结构的转导方法和细节外，还应解决修饰 T 细胞的特征。绝大多数研究只是利用从外周血或白细胞去除术中分离出来的外周血单核细胞 (PBMC) 的 CD3+部分。在大多数情况下和研究中， CD4+/CD8+细胞的组成以及给定细胞的表型是可变的，这可能导致无法在不同的环境中重现结果。使用先进的富集和细胞分选技术可以相对轻松地解决这个障碍[92] 。
还应监测 CD4+/CD8+ 比率，即 T 辅助细胞与 T 细胞毒性细胞的比率。CD4+/CD8+ 比率的生理值被认为在 1.5 和 2.5 之间，在不同种族、年龄类别等之间存在一些差异（在 [93] 中进行了审查）。正在接受化疗的患者通常具有明显更高的 CD8+ 细胞比例 [94] 。 CD4+ 和 CD8+ 细胞可分为几种表型亚型-幼稚 (Tn)、效应 (Teff) 和记忆 (Tm) T 细胞呈现 3 种主要的T 细胞表型亚型。记忆 T 细胞可进一步分为长寿命中央记忆(Tcm) T 细胞和短寿命效应记忆 (Tem) T 细胞亚型[95-97] 。完全源自 CD8+ 细胞的 CAR T 细胞在体外表现出更高的细胞溶解活性。 CD8+ CAR 的 Tcm 亚型在诱发肿瘤的小鼠中显示出最佳的存活率[98] 。

本文插图

同样， CD4+ 细胞产生更多不同的细胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-2）和 CD8+ 细胞，并且每种 CD4+ 表型亚型总体上都提高了小鼠模型的存活率 [98] 。 CD4+ 和 CD8+ T 细胞之间的协同作用先前已在小鼠模型中得到证实 [99] ，并且利用最佳 CAR T 细胞组成可能对患者有益。
4. 结论和未来展望
基于CAR T细胞的疗法目前用于治疗血液系统恶性肿瘤，并且有两种药物已经获得美国FDA的批准，未来具有相似特性的药品数量几乎肯定会增加。在临床实践中更广泛地使用 CAR T 细胞技术的主要挑战可能是 (i) 降低制造成本， (ii) 克服主要的安全隐患，以及 (iii) 通过引入更高级的构造。尽管病毒和非病毒方法各有优缺点，但非病毒方法在应对这些挑战方面具有巨大潜力，并将 CAR 技术带入血液病领域之外。