双特异抗体（BsAb）生物测定方法( 二 )

除了流式细胞术分析外，还开发了基于细胞的报告分析来测量抑制结合相互作用(如PD-L1/PD-1)的基因表达。这些检测提供了BsAb结合的功能性测量，而不是通过SPR直接测量结合亲和力。
效价测定
使用BsAb效价分析的策略是具有挑战性的，因为它具有两个靶标结合的复杂MOA ，效价测定应该为MoA进行量身定制，同时满足QC和监管部门的要求。关于BsAb效价测定的一个问题是，每个靶标结合是否需要两个测定，或者一个效价测定是否就足够了。根据其MOA ，最好是用一种效价测定来测量两个靶标结合的协同生物学效应，或者在一次测定中同时测出结合测定的两个效价。从成本/劳动力角度和对照角度来看，治疗分子生物活性的单一测定法也是有利的，但如果使用来自多个测定的的数据，则可能会错过由双重抗原结合产生的协同效应。然而，为了表明该分析是很好的证明MOA ，则必须正确的理解MOA中的关键事件，并且设计用于测量每个事件的特征化分析，例如，与任一抗原的结合、受体激活等都是必需的。
BsAb生物测定：效应器功能测定
一些BsAb以细胞表面蛋白或受体为靶标，目的是增强效应器功能。一只手臂通常以肿瘤相关抗原为靶标，而另一只手臂则以免疫系统表面蛋白(如CD47或CD16)为靶标，从而增加肿瘤细胞对补体或NK细胞裂解或巨噬细胞吞噬的敏感性。
其他BsAb的主要MOA不涉及效应器功能(如TDB或受体阻滞剂) ，但具有效应器活性的Fc结构域，也可以通过效应器功能发挥细胞杀伤活性。然而根据MOA和其分子特异性，效应器功能可能与不利的安全事件相关，因此，有些BsAb效应器沉默的Fc结构域是首选的。当然在其他情况下，效应器功能增强该分子的活性也是可行的。
BsAb生物检测：杂质检测
BsAb的杂质分析通常是物理化学分析，如SEC (用于测量聚集体和碎片)、毛细管等电聚焦/离子交换色谱(用于测量电荷变体)和质谱(用于灵敏地识别或量化翻译后修饰等) ，这些通常用于表征常规mAb 。然而， BsAb的独特结构可以产生独特的变体，对安全性和生物活性产生影响，而目前的物理化学检测并未完全解决这些问题。
小编总结
开发和实施生物疗法的生物检测方法已被行业和监管机构广泛接受，类似的原则也适用于双特异性疗法。 2021年5月24日， FDA发布双特异性抗体研发指南定稿版本，阐明了开发双特异性抗体的质量、非临床和临床考量，为开发者提供了建议和参考标准。 BsAb药物将会正式纳入常规药物。由于BsAb具有复杂的作用机制、多样的结构变化和双靶点结合等特点，开发生物检测和其他类型的检测方法来表征BsAb是一项具有挑战性的工作。开发BsAb的生物检测方法需要很好地理解分子的MOA ，不同生物分析方法的原理和应用，以及根据监管指南进行适当考量。