双特异抗体（BsAb）生物测定方法

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对于生物疗法来说，选择性的、与生物活性相关的生物测定对于评估产品的效力和稳定性是必不可少的。生物检测的范围可以从简单的结合方法识别特定的抗原，到复杂的检测系统，比如在基于细胞的方法中阻断抑制配体、恢复共刺激效应。
虽然生物检测设计和策略的一般原则(例如，测量抗原靶标结合和生物活性)适用于双特异性抗体，但开发双特异性抗体的生物检测需要独特的考虑，因为双特异性抗体结合两个不同的靶点，具有与单抗生物疗法不同的作用机制。各种生物分析方法已被开发并用于研究BsAb ，包括评估结合、效力、生物学功能和纯度的方法。下图中描述了各种类型的BsAb生物检测中涉及的几种代表性的方法。本文就此做一个简单介绍。

本文插图

结合试验
ELISA和SPR通常用于体外鉴定BsAb的抗原结合。 ELISA的优势在于它们灵敏，与基于细胞的分析相比，通量高，相对便宜，并且可以在复杂的基质中进行。桥联ELISA和竞争性结合ELISA还可以提供有关BsAb同时结合这两种抗原的能力的信息，因此它们可能被用作在最初阶段反映MoA效力分析。
ELISA分析也有缺点，其中之一是它是终点分析，不能提供有关结合动力学的信息，如开启和关闭速率。相比之下， SPR测量流动中的连续结合，并且整个结合事件可以实时分析(结合和解离) 。 SPR分析也可以测量同时与两个靶的结合。
ELISA和SPR的缺点都是很难测量靶标密度(亲和力效应)对BsAb结合的影响，这可能是体内BsAb活性的重要因素。 SPR允许通过在传感器芯片上固定不同数量的捕获配体来控制靶密度。然后，治疗性抗体的结合可以在不同条件下表征，以研究受体密度对结合亲和力的影响。然而，由于BsAb结合两个靶点，亲和力的程度取决于结构/format ，这使得这种类型的实验在设计和解释基于无标记质量的检测时具有挑战性。另外，关于结合事件的体内相关性，还有一些悬而未决的问题，例如，与芯片上固定的配体的结合有多相关；截短的配体是否能够反映与细胞表面受体的结合。
细胞表面配体结合分析
研究中的BsAb与其靶标的结合特性也可以通过流式细胞术来评估，这可以用来在细胞环境中测量BsAb的结合特异性和选择性。这些信息在传统的基于SPR或ELISA的结合分析中无法捕捉到。流式细胞术，是一种基于流体和光学的方法，它评估单个细胞流中荧光标记的细胞悬液，以捕捉完整细胞中的受体或抗原结合事件。然而，抗体结合的流式细胞术分析是对动力学数值的间接测量，应该与SPR分析结合使用，以便为所研究的抗体提供全面和准确的动力学数据。