由单细胞层面探究鼻咽癌的肿瘤异质性和细胞间的互作网络( 二 )

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细致的T、NK细胞亚群分类
单细胞免疫组测序不仅包括5'转录组测序，还包含了对于TCR/BCR的测序组装，相对于常规的3'单细胞转录组可以获得更多的信息。所以接下来，作者引入了TCR测序结果，首先作者发现不同样本间没有共享的TCR克隆型。同时，作者发现这些NPC样本都具有一定的VJ偏好性。

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VJ配对圈图
（本公司的报告中也包含嗷）
对于高变的CDR3(免疫组测序可以获得全长序列)的研究发现， CAVRGTGTASKLTF and CASSFSGANVLTF 这两条序列已经被确认与MLANA和EBV抗原有关。同时，与单细胞的亚群分类结果相结合分析，作者发现， CD4和CD8T细胞都有更多的克隆型，而且不同的细胞具有相同的TCR克隆型，这表明在肿瘤抗原连续刺激后，肿瘤浸润T细胞的克隆扩张。

【由单细胞层面探究鼻咽癌的肿瘤异质性和细胞间的互作网络】
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CD8+细胞的多样性与耗竭T细胞的分化产生
接下来，作者主要关注了CD8+T 细胞亚群，常规介绍了这些亚群的表达特征，在不同组别中的分布特点，然后与上文一样，通过差异分析和富集分析开始说明具体的细胞亚群功能，例如，举例肿瘤细胞毒性CD8T细胞簇(CD8_C7_GZMK、CD8_C8_MHC和CD8_C9_XCL1)具有与细胞因子产生和淋巴细胞激活相关的途径富集；CD8_C5_CX3CR1富集在白细胞跨内皮迁移和白细胞迁移相关的途径中。接下来，作者通过拟时序分析来说明CD8+T不同状态下的过度与表达情况。值得一提的是作者使用了TCR、基因表达对T细胞的扩增分布、迁移和转化能力等进行了量化。并且与拟时序分析进行了结合，作者发现肿瘤内耗竭的CD8+T细胞和发挥免疫抑制的调节性T细胞可能分别来源于外周血中的CX3CR1+CD8+T细胞和幼稚的调节性T细胞。 CX3CR1+CD8+T细胞不仅具有高细胞毒性和高迁移能力，并且与肿瘤内浸润的CD8+T细胞共享大约10%的TCR克隆型。这些结果说明， CX3CR1+CD8+T细胞具有潜在渗透进入肿瘤组织的能力，并且可以通过TCR识别杀伤肿瘤细胞。这些结果亦提示潜在的细胞治疗策略，即可以通过在体外扩增鼻咽癌病人外周血中的CX3CR1+CD8+T细胞亚群，再回输到病人体内进行细胞治疗；或者利用CX3CR1修饰T细胞来增强T细胞的迁移和进入肿瘤的能力。

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NPC中Treg细胞的多样性和发展轨迹