脱钙组织的IHC检测

交通大学附属上海市第一人民医院病理中心
臧丽娟技师长
一、骨组织的构成

骨组织由大量钙化的细胞间质及数种细胞组成，钙化的细胞间质称为骨基质。骨基质由有机成分和无机成分组成， 35%有机成分含有大量骨胶原纤维等， 65%无机成分主要为羟基磷灰石结晶，呈细针状沿胶原纤维长轴排列，形成坚硬的板状结构。
二、脱钙
由于含有骨质成分的组织较为坚硬，再加上组织脱水后整个组织块硬度增加，如果含钙组织不进行脱钙处理，组织切片刀难以完成切片这一环节，从而影响后续步骤。因此在组织脱水前进行脱钙处理尤为重要。目前我们最常用的是将硝酸进行脱钙处理，硝酸可以将部分钙离子中和，形成硝酸钙溶于水，但是即使是其他脱钙液在组织处理中对细胞的蛋白胶原及其他成分包括部分抗原溶解丢失，或者抗原决定簇的隐蔽不能被检出等都略有影响，其中切片黏附差（脱片）是重要的影响。
三、脱钙组织的备片
供免疫组化的石蜡切片厚度为3微米要求平整，不间断的切片，且附贴需牢固，从40度水缸漂片（保持洁净）晾干，吸去多余水份，至65度烘片机内1小时后取出。免疫组化切片最好现切现做。需脱钙处理的组织经脱水包埋后，按上述要求制片。手工做免疫组化染色时间长。过程中反复多次浸泡于试剂中并且震荡洗涤，即使使用免疫组化染色仪其中热修复这一重要环节也是必不可少，从室温加热至92度-98度，再冷却。经过脱钙处理后的组织更易脱片，切片不完整影响免疫组化的镜下观察。
四、美鑫达直接免疫组化技术
原理：通过聚合的HRP直接缀合到一抗上，带有HRP多聚酶缀合的一抗可以直结滴加到处理好的组织切片上，经过几分钟到十几分钟的短暂孵育，在一抗结合组织的抗原后可在冲洗后加底物显色。不需要多聚酶标记的二抗放大系统，可以减少洗涤加样再洗涤等多个步骤。对脱钙组织的切片有利于减少脱钙组织的脱片现象，避免脱钙后抗原决定簇的不被检出，并可加快IHC程序，最大限度缩短IHC的染片时间。除以上外，直接免疫组化对在对骨肿瘤组织，喉部肿瘤等含骨质较多的组织切片进行免疫组化检测对组织切片制备的要求，如脱蜡和抗原修复的处理，以及显色和结果判读等流程和常规IHC染色检测没有很大区别。
病例赏析
该病例诊断为：（骶骨）转移性小细胞神经内分泌癌。
免疫组化结果：
Ki67（约50%+）， CK（+）， CEA（少量+）， S-100（-）， LCA（-）， Vim（-）， CgA（弱+）， Syn（+）， CD56（+）， TTF-1（+)；
CK7（-）， NapsinA（-）， CK5/6（-）， P63（-）， P40（-）， CK20（-）， CDX-2（-）， CD99（+）；