PCR仪的使用方法 _PCR仪如何设置

PCR仪的使用方法方法：
1、将DNA加热（至90~95℃）变性，将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板。
2、则是令Primers于一定的温度下（冷却至55~60℃）附着于模板DNA两端。最后在DNA聚合酶e.g.Taq-polymerase的作用下（加热至70~75℃）进行引物的延长Extensionofprimers及另一股的合成。
标准PCR仪也叫做终点PCR仪，是指目的基因仅经过预变性、变性、退火、延伸阶段产生大量的核酸序列的PCR仪，PE-Cetus公司推出的世界上第一台PCR自动化热循环仪属于此种。
根据PCR退火温度和扩增条件（细胞内/外），标准PCR又可以分为三类：普通PCR、梯度PCR和原位PCR 。
PCR是分子生物学研究极其重要的工具，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制，即人为创造核酸半保留复制条件，使目的DNA在细胞外完成扩增的过程，它可被看作是生物体外的特殊DNA复制。
扩展资料
1、普通PCR仪：一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为普通PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。主要是用作简单的、对单一退火温度的目的基因的扩增。主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。
2、梯度PCR仪：普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。梯度PCR仪每个孔的温度可以在指定范围内按照梯度设置，一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度) 。由于被扩增的DNA片段不同，其最佳退火温度也不同，通过梯度设置。
可一次性筛选出最佳的退火温度。这样既可节省试验时间，提高实验效率，又能节约实验成本。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用。梯度PCR仪多应用于科研、教学机构。
3、原位PCR仪：是将PCR技术的高效扩增与原位杂交的细胞定位结合起来，用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪，从而在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技术的待检标本一般先经化学固定，以保持组织细胞的良好形态结构。
细胞膜和核膜均具有一定的通透性，当进行PCR扩增时，各种成分，如引物、DNA聚合酶、核苷酸等均可进进细胞内或细胞核内，以固定在细胞内或细胞核内的RNA或DNA为模板，于原位进行扩增。
原位PCR仪对于在分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有着重要意义。
参考资料来源：百度百科-PCR仪

PCR仪如何设置1、按 PCR 仪正面左下角电源开关，启动 PCR 仪。
2、放 PCR 离心管，先把顶盖向上扳，再往前推，露出放样孔，PCR 管
放入前应加好反应体系各组分，再放入 PCR 离心管。
3、反向重复第二步骤将顶盖板向后拉，盖好顶盖。
4、按 F2“Create”新建一个扩增的 PCR 程序。
5、按控制台面右方上下左右方向键，可随意移动编辑位置，输入需要
的温度、时间、循环数等。
6、据 PCR 离心管中加入的反应体积总量，在“Reaction volume”后输入
相应数值，有 Std“1～100ul”和 9600“1~50ul”两档可供选择。
7、按 F1“Start”启动
8、按“INFO”对应键查看 PCR 结束键。
9、扩增完成后按台面左方“Stop”键退出。
10、按“Hist”，可查看上次扩增的历史记录。11、完全退出后，按台面左下方电源开关，拔出插销，切断电源。
PCR仪热盖作用PCR仪热盖作用是防止蒸发的水汽在管盖上凝结。反应液中的水份还是会有部分变成蒸汽在管中，只是不会凝结在管盖上（如果没有热盖也不加石蜡油，反应管中的水份会全都凝结在管盖上的）。

PCR仪的热盖大致可以分为以下四种：非可调式热盖、可调节式热盖、自适应式热盖和自动式热盖。
1、非可调式热盖：即热盖并不能同时适用于高管和矮管，如AB的2720等只能用高管，用矮管得手工加铝块。
2、可调节式热盖：即热盖的高度可以手工调节，同时适用于各种高管和矮管，但压力需要自己感觉，用力过小或过大都可能会有麻烦。
【PCR仪的使用方法】因为有这个问题，后来又出了力矩式可调热盖，即热盖旋转到一定力矩后内置机构打滑，从而保证一定的热盖压力。
3、自适应式热盖：即热盖自带预压紧的弹簧，通过与打开和关闭热盖的手柄机构相结合，达到压手柄时自动压紧热盖，开手柄时自动松开热盖，自适应高管和矮管，不用担心压力和没有松开热盖等问题。
4、自动式热盖：即热盖是由电机来控制的压紧与松开的。一般用于与实验室自动化相配合的PCR仪，或称为全自动PCR仪，但价格都较高。