#神经时讯TB#银杏内酯注射液抑制脑缺血再灌注模型大鼠内质网应激和自噬( 二 )

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3：GIs抑制tMCAO所致自噬水平的上调
基础状态下，给予GIs（2.5 mg/kg）24 h或72 h ，对大鼠脑组织胞浆内P62及LC3蛋白表达无明显影响。 tMCAO模型缺血再灌24、72 h ， P62蛋白表达下降，而LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ的比率上升，同假手术组相比，差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），表明缺血再灌后脑内自噬水平升高；给予GIs后能抑制tMCAO所致自噬水平升高，表现为抑制P 62 的下降和LC3Ⅱ/Ⅰ比率的上升，与模型组比较差异具有统计学意义（P＜0.05 ，图 3）。结果提示，银杏内酯注射液抑制tMCAO所致自噬水平的上调。

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讨论与分析
缺血再灌注损伤的病理机制较复杂，包括兴奋氨基酸和氧自由基的释放增加、内质网功能紊乱、线粒体释放细胞凋亡因子、炎症因子的产生等一系列“瀑布样”级联反应事件，内质网应激是其中必不可少的环节之一。脑缺血后，细胞内未折叠蛋白增加，内质网肿胀，引起未折叠蛋白反应（UPR）， UPR初始状态下发挥保护作用，随着反应的延长和加重，引起细胞死亡，这种死亡方式通常是通过凋亡引起，主要在chop、caspase 12、JNK介导下发生。 CHOP主要通过下调Bcl-2 ，上调ＲOS发挥作用。激活的caspase 12可加工胞浆中下游 caspases影响凋亡的进程。
研究发现，银杏内酯可以上调Bcl-2/Bax比率，下调caspase 3的表达，发挥抗凋亡作用。此外，内质网应激也是自噬发生的重要因素，可通过IRE1-XBP1、PERK-eIF2及ATF6三条信号通路诱导自噬。有研究报道，缺血后自噬诱导的死亡也是内质网应激过度的后果。抑制内质网应激可以发挥缺血后神经保护作用， CHOP基因敲除鼠较正常小鼠有更好的抗缺血作用。本研究结果显示， GIs抑制再灌24 h、72 h CHOP、caspase12成熟体蛋白水平的升高，抑制缺血再灌注引起的内质网应激。
内质网应激的结果之一是诱导细胞内自噬的发生。脑缺血后，细胞组分遭到破坏、内质网应激的发生、ROS的大量生成等因素诱导自噬水平上升。缺血初期或轻度缺血的情况下，自噬消除细胞受损物质，提供能量和营养，发挥保护作用。再灌后，随着自噬反应的加重和不受控制，消耗大量的重要细胞组分和促存活因子，引起能量耗竭、DNA断裂等，激活凋亡、自噬性死亡、坏死。自噬相关基因Atg 7敲除或应用自噬抑制剂3-MA ，可以改善缺血后脑损伤。本研究结果显示， GIs抑制tMCAO大鼠缺血复灌24 h、72 h LC3I向LC3II的转化，抑制自噬底物P 62的降低，抑制缺血再灌注引起的自噬水平过度升高，发挥神经保护作用。
综上所述， GIs可以减轻缺血急性期治疗损伤引起的神经功能障碍、脑水肿，减小梗死体积，其机制与抑制内质网应激和自噬相关。
参考资料：兰新新,曹磊,王林晓等.银杏内酯注射液抑制脑缺血再灌注模型大鼠内质网应激和自噬[J] .中国临床药理学与治疗学.
编辑 | 丁慧鑫
审校 | 董晓慧