#神经时讯TB#银杏内酯注射液抑制脑缺血再灌注模型大鼠内质网应激和自噬

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缺血性卒中已经成为严重威胁人类健康的临床常见病，治疗手段以早期溶栓为主，但存在治疗时间窗短、不能改善再灌注损伤等问题。中药对脑缺血再灌注损伤的保护作用日益受到重视，如银杏类制剂在临床应用于心脑血管疾病多年，具有良好的疗效。
银杏内酯注射液（GIs）是国内首个获批上市的银杏萜类内酯单体组分含量达99%的注射液，其中银杏内酯B（GB）和白果内酯（BB）分别占34%和48% 。研究认为， GB和BB为银杏类制剂中的重要活性成份，其作用机制包括抗兴奋性毒性、抑制氧化应激损伤、抗血小板聚集以及抗炎等，被认为是多靶点多效应的神经保护
【#神经时讯TB#银杏内酯注射液抑制脑缺血再灌注模型大鼠内质网应激和自噬】

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越来越多的研究发现，内质网应激与自噬在脑缺血病理过程中发挥着重要作用。目前，关于银杏内酯是否影响缺血后内质网应激和自噬的研究较少，仅有少数研究报道， GB可以通过抑制内质网应激改善丁哌卡因刺激下SHSY-5Y细胞株的死亡，银杏总内酯可以抑制缺血后Beclin-1表达。本研究在验证GIs对脑缺血再灌注损伤治疗作用的基础上，探讨GIs对在体大鼠缺血再灌注内质网应激、自噬的影响，结果显示， GIs减轻脑缺血再灌注急性期损伤，其机制与抑制内质网应激和自噬相关。
研究方法
研究采用Longa法制备大鼠短暂性大脑中动脉阻塞（tMCAO）/再灌注损伤模型，于缺血再灌注1 h后腹腔注射（i.p. ， bid）不同剂量的GIs（1.25、2.5、5 mg/kg），连续治疗3 d并进行神经功能评分，干湿重法测定脑组织含水量， TTC染色法测定脑梗死体积；银杏内酯注射液保护作用机制研究分为4组：假手术组（Sham）、假手术+GIs2.5 mg/kg组（Sham+GIs）、模型组（tMCAO+Saline）、模型组+GIs 2.5 mg /kg组（tMCAO+ GIs）。 Sham+GIs组与tMCAO+GIs组缺血再灌注1 h给予GIs（i．p．， Bid ， 2.5 mg /kg），余2组同法给予无菌生理盐水， 24 h和72 h时取样， Western Blotting法检测缺血半影区内质网应激、自噬等相关蛋白表达。
研究结果
1：GIs可以改善tMACO大鼠脑缺血再灌注损伤
再灌注后1 h给予GIs的各组大鼠，一般状态明显优于模型对照组。其中， 2.5、5.0 mg/kg GIs组与模型组比较差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01 ，图1 A）；脑组织含水量同样显示2.5、5.0 mg/kg GIs组明显低于模型对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01 ，图1B）；脑梗死体积结果显示（图1C和D）， GIs 1.25、2.5、5.0 mg/kg均显著减少tMCAO大鼠脑梗死体积，与模型组比较差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。结果提示，缺血再灌后1 h给予GIs具有改善tMCAO模型大鼠神经运动功能、减轻脑水肿、减小脑梗死体积的作用。

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2：GIs抑制脑缺血再灌注损伤所诱导的内质网应激
基础状态下，给予GIs（2.5 mg/kg）24 h或72 h ，对大鼠脑组织胞浆内CHOP、caspase12蛋白表达无显著影响。缺血再灌24 h、72 h后，模型组半影区CHOP蛋白表达明显升高，同假手术组比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）；给予GIs（2.5 mg/kg）抑制CHOP蛋白水平的升高，与模型组比较差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01 ，图2 A、B、D、E）。缺血再灌24 h ，模型组大鼠半影区caspase 12成熟体蛋白表达明显升高，与假手术组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）；给予GIs（2.5 mg/kg）抑制caspase12成熟体蛋白水平的升高，较模型组差异具有统计学意义（P＜0.01 ，图2 A、C）；至缺血再灌72 h ，模型组大鼠caspase12成熟体蛋白表达与假手术组相比差异无统计学意义（图2 D、F）。结果表明， GIs抑制脑缺血再灌注损伤所诱导的内质网应激。