『实验室设计与建设专家』金匮肾气丸对肾阳虚证模型小鼠抗寒抗疲劳能力的改善效果观察【实验目的】本实验以外源性糖皮质激素

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【实验目的】
本实验以外源性糖皮质激素（氢化可的松琥珀酸钠）制作小鼠肾阳虚模型，观察小鼠的一般情况和抗寒、抗疲劳的能力，并以补肾方剂——金匮肾气丸进行佐证，验证中医肾阳虚证模型的造模方法，加深学生对肾阳虚证和金匮肾气丸治疗作用的认识。
【实验原理】
用一定剂量的外源性糖皮质激素（如氢化可的松琥珀酸钠）使垂体前叶的促肾上腺皮质激素（ACTH）释放受抑，转而使肾上腺皮质分泌类固醇激素减少，动物出现耗竭现象，如拱背、蜷曲、游泳和耐寒时间缩短，畏寒肢冷且挤卧在一起，制作成功肾阳虚小鼠模型后，再灌服补肾阳代表方剂——金匮肾气丸，比较观察三组动物的变化。
【实验对象】
清洁级昆明种小鼠，体重18g±2g 。
【实验材料】
器材：注射器，剪刀，镊子，天平，游泳池。
试剂：氢化可的松琥珀酸钠，金匮肾气丸。
【方剂解读】
金匮肾气丸出自《金匮要略》一书。它由炮附子、熟地黄、山茱萸、泽泻、肉桂、丹皮、山药、茯苓八味药组成。功效是温化肾气，温补肾阳。主治肾阳不足，症见腰膝酸软，下半身常有冷感，少腹拘急，烦热不得卧而反倚息，小便不利或小便过多，阳痿精冷，舌质淡而胖，脉虚弱，尺部沉微，以及痰饮、消渴、脚气等证。
方中熟地黄甘温，滋阴补肾为主药；辅以山茱萸、山药补肝益脾，以补充精血，山茱萸酸，微温，补肝肾、涩精气；再配少量附子、肉桂温肾助阳，补命门真火，引火归原；佐以泽泻通调水道，泄肾中水邪；茯苓健脾渗湿，以丹皮清泄肝火，并制山茱萸的温涩。
【『实验室设计与建设专家』金匮肾气丸对肾阳虚证模型小鼠抗寒抗疲劳能力的改善效果观察】【实验步骤】
1.试剂的配制氢化可的松琥珀酸钠注射液：以生理盐水稀释成浓度为1mg/0.1mL ，每次注射前摇匀。
2.标号与分组以市售染发剂进行标号（标号方法请参见本书第三章第四节“分组、编号及标记方法”），后随机将小鼠分为正常对照组、模型组和治疗组（给予金匮肾气丸治疗），每组10只。
3.造模与给药实验开始的第1天，造模组与给药组每日每只小鼠大腿外侧肌肉注射氢化可的松琥珀酸钠1mg ，共注射8天，正常对照组则每日每只小鼠注射生理盐水0.1mL ，共8天。于造模当天治疗组给予金匮肾气丸临床等效量灌胃（剂量为0.1g/100g体重），每日1次。正常对照组和模型组则灌服等体积的生理盐水。观察小鼠在每天注射氢化可的松琥珀酸钠后的体征表现，并进行记录（最好留录像资料）。
4.称重试验中每天称取小鼠的体重，记录在下面表格中（表6-1）。
表6-1小鼠体重记录表

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5.冰水实验于实验的第8天，分别取三组小鼠各10只同时放入4℃冰水中，计算其在冰水中游泳疲劳直至死亡的时间（表6-2）。
表6-2小鼠游泳疲劳直至死亡时间

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6.取材待小鼠死亡后立即取出，迅速在冰上摘取全脏器，计算各脏器指数。计算公式：各脏器指数=脏器重量/体重×100%（表6-3）。
表6-3各组实验小鼠的脏器指数比较

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7.统计学处理使用SPSS10.0统计软件，用单因素方差分析方法进行数据统计。
【注意事项】
1.冰水游泳实验时注意防止小鼠之间的踩踏，因此一定注意保持小鼠之间的隔离。