过氧化物酶活性的测定实验报告,过氧化物酶pod活性测定实验报告 _知识分享

本文目录

1.过氧化物酶pod活性测定实验报告
2.过氧化物酶活性的测定比色法
3.过氧化物酶活性的测定实验报告总结与反思
4.过氧化氢酶的测定

过氧化物酶pod活性测定实验报告

文章插图
过氧化物酶活性的测定比色法实验
48
过氧化物酶活性的测定（比色法）
过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。
一、原理
在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在
470
nm
处有最大吸收，可用分光光度计测量
470
nm
的吸光度变化测定过氧化物酶活性。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
马铃薯块茎。
（二）试剂
1
．
100
mmol
／
L
磷酸缓冲液
pH6.0
（见附录）。
2
．反应混合液：
100
mmol
／
L
磷酸缓冲液（
pH6.0
）
50
mL
于烧杯中，加入愈创木酚
28
μl
，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入
30
%
过氧化氢
19
μl
，混合均匀，保存于冰箱中。
（三）仪器设备
分光光度计，研钵，恒温水浴锅，
100
mL
容量瓶，吸管，
离心机。
三、实验步骤
1
．称取植物材料
1
g
，剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以
4000
r
／
min
离心
15
min
，上清液转入
100
mL
容量瓶中，残渣再用
5
mL
磷酸缓冲液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，贮于低温下备用。
2
．取光径
1
cm
比色杯
2
只，于
1
只中加入反应混合液
3
mL
和磷酸缓冲液
1mL
，作为对照，另
1
只中加入反应混合液
3
mL
和上述酶液
1mL
（如酶活性过高可稀释之），立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长
470
nm
下吸光度值，每隔
1min
读数一次。
四、结果计算
以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以
ΔA
470
/[min
•
g
（鲜重）
]
表示之。也可以用每
min
内
A
470
变化
0.01
为
1
个过氧化物酶活性单位（
u
）表示。
过氧化物酶活性
[u/
（
g
•
min
）
]=
式中：
Δ
A
470
——反应时间内吸光度的变化。
W
——植物鲜重，
g
。
V
T
——提取酶液总体积，
mL
。
V
s
——测定时取用酶液体积
,
mL
。
t
——反应时间，
min
。

文章插图
过氧化物酶活性的测定实验报告总结与反思影响酶活性的因素”是高中现行生物学课本中的一个实验内容，也是第1个探究性实验。但是，教材中所介绍的实验药品（α-淀粉酶）价格较贵，实验设计思路为定性实验。能否改进实验设计方案，使其不仅能培养学生的实验技能和实验设计能力，通过实验过程理解影响酶活性的因素的知识内容，而且促使学生积极参与探究活动，养成实事求是的科学态度和一丝不苟的科学探究精神呢？为此，笔者进行了一些有益的尝试。
1 实验设计
1．1 选用过氧化氢酶作为实验探究对象过氧化氢是细胞中某些化学反应的副产物，具有强氧化性，如果不及时除去或分解，就会杀死细胞。在动物的肝细胞和血细胞中含有较多的过氧化氢酶，它可以促进过氧化氢分解。由于过氧化氢酶容易获得且催化反应的现象明显，所以选用过氧化氢酶作为实验探究对象。
1．2 设备准备实验用具有：细胞培养瓶（代替反应小室）、刻度吸管、镊子、水槽、25 mL量筒；反应底物为30％H2O2，也可以用原包装双氧水配制的3％H2O2，但反应速度慢，现象不太明显，反应时间长。