本文目录过氧化物酶pod活性测定实验报告
- 1.过氧化物酶pod活性测定实验报告
- 2.过氧化物酶活性的测定比色法
- 3.过氧化物酶活性的测定实验报告总结与反思
- 4.过氧化氢酶的测定
文章插图
过氧化物酶活性的测定比色法实验
48
过氧化物酶活性的测定(比色法)
过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化 。
一、原理
在有过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色物质,该物质在
470
nm
处有最大吸收,可用分光光度计测量
470
nm
的吸光度变化测定过氧化物酶活性 。
二、实验材料、试剂与仪器设备
(一)实验材料
马铃薯块茎 。
(二)试剂
1
.
100
mmol
/
L
磷酸缓冲液
pH6.0
(见附录) 。
2
.反应混合液:
100
mmol
/
L
磷酸缓冲液(
pH6.0
)
50
mL
于烧杯中,加入愈创木酚
28
μl
,于磁力搅拌器上加热搅拌,直至愈创木酚溶解,待溶液冷却后,加入
30
%
过氧化氢
19
μl
,混合均匀,保存于冰箱中 。
(三)仪器设备
分光光度计,研钵,恒温水浴锅,
100
mL
容量瓶,吸管,
离心机 。
三、实验步骤
1
.称取植物材料
1
g
,剪碎,放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆,以
4000
r
/
min
离心
15
min
,上清液转入
100
mL
容量瓶中,残渣再用
5
mL
磷酸缓冲液提取一次,上清液并入容量瓶中,定容至刻度,贮于低温下备用 。
2
.取光径
1
cm
比色杯
2
只,于
1
只中加入反应混合液
3
mL
和磷酸缓冲液
1mL
,作为对照,另
1
只中加入反应混合液
3
mL
和上述酶液
1mL
(如酶活性过高可稀释之),立即开启秒表记录时间,于分光光度计上测量波长
470
nm
下吸光度值,每隔
1min
读数一次 。
四、结果计算
以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小,即以
ΔA
470
/[min
•
g
(鲜重)
]
表示之 。也可以用每
min
内
A
470
变化
0.01
为
1
个过氧化物酶活性单位(
u
)表示 。
过氧化物酶活性
[u/
(
g
•
min
)
]=
式中:
Δ
A
470
——反应时间内吸光度的变化 。
W
——植物鲜重,
g
。
V
T
——提取酶液总体积,
mL
。
V
s
——测定时取用酶液体积
,
mL
。
t
——反应时间,
min
。
文章插图
过氧化物酶活性的测定实验报告总结与反思影响酶活性的因素”是高中现行生物学课本中的一个实验内容,也是第1个探究性实验 。但是,教材中所介绍的实验药品(α-淀粉酶)价格较贵,实验设计思路为定性实验 。能否改进实验设计方案,使其不仅能培养学生的实验技能和实验设计能力,通过实验过程理解影响酶活性的因素的知识内容,而且促使学生积极参与探究活动,养成实事求是的科学态度和一丝不苟的科学探究精神呢?为此,笔者进行了一些有益的尝试 。
1 实验设计
1.1 选用过氧化氢酶作为实验探究对象 过氧化氢是细胞中某些化学反应的副产物,具有强氧化性,如果不及时除去或分解,就会杀死细胞 。在动物的肝细胞和血细胞中含有较多的过氧化氢酶,它可以促进过氧化氢分解 。由于过氧化氢酶容易获得且催化反应的现象明显,所以选用过氧化氢酶作为实验探究对象 。
1.2 设备准备 实验用具有:细胞培养瓶(代替反应小室)、刻度吸管、镊子、水槽、25 mL量筒;反应底物为30%H2O2,也可以用原包装双氧水配制的3%H2O2,但反应速度慢,现象不太明显,反应时间长 。
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