上次分不清几种基因修饰小鼠的人已经凉了( 四 )

上次分不清几种基因修饰小鼠的人已经凉了

图 2:基因敲除小鼠制备示意图

这里有个需要注意的雷是某些敲除虽然发生了移码,但是蛋白水平检测发现,未能敲除目的基因。目前维通达采用双 gRNA 策略,删除关键外显子或整个目的基因,确保有效敲除目的基因,由于删除了一个大的片段,PCR 检测时,敲除小鼠很容易与野生型区别。

条件敲除小鼠

敲除致死的唯一模型

当目的基因敲除致死时,只能做条件敲除,常用 Cre-loxp 系统。那么如何操作呢?方法是在要敲除的区域两侧插入 loxp,得到的 floxed 小鼠与组织特异表达 Cre 的小鼠杂交,在 Cre 的作用下,两个 loxp 之间的区域被删除,可以实现在特异的组织敲除目的基因。条件敲除虽然也是敲除,但是制备这种小鼠实际是要定点插入 loxp 序列。