LncRNA 亚细胞定位,这个网站就够了

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正文开始:

「亚细胞定位」已是高水平期刊对 lncRNA 研究的基本要求。一提到 lncRNA 定位,马上想到 FISH 的小伙伴肯定是学霸。

今天推荐一个检索 LncRNA 亚细胞定位信息的专门网站。不卖关子,直接上链接,lncATLAS:http://lncatlas.crg.eu/。目前该网站已收集了经 GENCODE 注释的 6 700 余种 lncRNA,涵盖在人体 15 种细胞系中的定位信息。

网站搜索很简单,刚一接触这个网站时,发现返回的图形化结果不好懂。我就 email 网站开发者,表达诉求「直截了当地告诉小伙伴们,某某 lncRNA 的亚细胞表达定位情况不就行了吗」?但 lncATLAS 偏不这样做,而是提供最科学的分析数据和可发表的图形化结果。检索结果分三个层面展示:

S1:所关注 lncRNA 在 15 株细胞系中的亚细胞定位情况;

S2:综合了所有 lncRNA 及 mRNA 信息的亚细胞定位情况;

S3:更加精细的核或浆的次级组分(compartments)定位情况。

下面以 MALAT1 为例,一步一步为您解读。如有不当的地方,欢迎留言指正。

01

搜索

网站界面简洁,没有复杂的限定条件。采用 official GENCODE gene name 或 ENSEMBL gene ID 输入相应的搜索框。Add reference gene 选项可忽略,因为结果价值不大。在 lncATLAS,lncRNA 也被称为 gene。点击 「GO」。

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02

结果解读

S1:MALAT1 的亚细胞定位情况(所有细胞株)。

该网站的一个特色就是发明了一个指标,表征亚细胞定位的准确性和可信性。RCI,Relative Concentration Index,依据 ensemble 收录的各细胞组分中 RNAseq 数据计算而得。反映 lncRNA 定位在细胞组分 A 相对于在组分 B 中的富集程度。

以 CN RCI 为例,C 表示胞浆 Cytoplasmic,N 表示胞核 Nuclear,正值表示定位于胞浆,负值表示定位于核内,绝对值越大定位强度越大。如 Plot1 所示,MALAT1 在胞浆和胞核中均有表达,但更多地定位在胞核中(丰度更高)。

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S2:呈现的是综合了所有 lncRNA 及 mRNA 信息的亚细胞定位情况。

S2 部分包含 3 个数据图——Plot 2,3,4。分别从所有细胞、单个细胞,连续分布直方图、表达比较的密度图等角度展示所关注 lncRNA 的亚细胞定位情况。引入全体 lncRNA 和 mRNA 的亚细胞定位情况是 lncATLAS 的特色。体现了在 RCI 算法下,包括所关注 lncRNA 在内的所有的 lncRNA 和 mRNA 的亚细胞定位情况。从另一角度看,是在炫耀其背后强大的数据支持(基于 ensemble 数据库的 RNAseq 数据)。

Plot 2 在所有细胞中以 RCI 分布所表征的亚细胞定位情况(注:为在有限的手机界面上清晰呈现图片内容,plot 2 中只截取 3 个细胞系的数据)。

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Plot 3 以连续直方分布图的形式,呈现在特定细胞系(GM12878)中,所关注 lncRNA 的亚细胞定位情况。有 15 个细胞系可选,当然,如果所选的细胞系没有相应数据,就不会呈现 Plot3。

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Plot 4 以密度图的形式,呈现在特定细胞系(GM12878)中,所关注 lncRNA 的亚细胞定位情况。通过向纵、横坐标轴划线,确定 MALAT1 在坐标轴中的位置,可以方便我们理解 MALAT1 的定位情况和表达丰度。

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S3:所关注 lncRNA 在核、浆次级组分水平的定位情况。

Plot5 以 K562 细胞系为模型,展现了 MALAT1 在核、浆次级组分水平的定位情况,如 Insoluble fraction,Cell membrane,Chromatin,Nucleoplasm 和 Nucleolus。不清楚各次级细胞组分位置的小伙伴请看题图。(图 6. S3-Plot5)

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在这里你可能会问,从前面的数据得知 MALAT1 是定位在核里的呀,怎么这里又说也定位在 Insoluble fraction,Cell membrane 呢?你的怀疑没有错,lncATLAS 也没有错。因为细胞各组分的测序数据中都有 MALAT1 的序列,MALAT1 更多的表达在核里而已。

小伙伴们,总结一下 lncATLAS 的特征:发明了 RCI 值,定量亚细胞定位的可信度,同时参考表达丰度,以可发表的数据图的形式表现 lncRNA 亚细胞定位信息。

因为不同的细胞,lncRNA 的亚细胞定位不一样,想快速确定 lncRNA 的定位,FISH 定位需要有严格的技术要求,那么胞浆胞核分离确定定位情况将是不错的选择,

下方的胞浆/胞核分离试剂盒值得一试,扫描二维码或点击阅读原文可查看详情解说。

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