这个冬天，几个樱桃——值得你拥有( 二 ) 来源：idiabetes编者按：自患上糖尿病

研究概述研究采用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)检测在正常血糖5mM和高血糖30mM、有或没有两种浓度(1 ng/μL或50ng/μL)的富花青素酸樱桃提取物的条件下，通过评价TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1α等4种促炎细胞因子的活性氧ROS水平以及NOS、ET-1和ECE-1的基因表达水平，解释了高血糖诱导的氧化应激和炎症反应及血管舒张功能受损过程，探究了检测富含花青素的匈牙利酸樱桃提取物对高血糖诱导的依赖内皮细胞的血管舒张功能障碍的作用和作用机制。
研究结果01、初步研究
初步色谱分析，酸樱桃的主要花青素成分是氰基-3-芦丁苷和氰基-3-O-葡萄糖苷， HUVECs分离用流式细胞术表征为阳性和阴性标记表达，这是最近以HUVE为C导向研究中经常使用的方法[23] 。根据MTT、凋亡和坏死实验，确定了富含花青素酸樱桃提取物的最佳浓度[24] 。
02、花青素酸樱桃提取物对维持高血糖状态的HUVEC活力的影响
根据上述确定的最佳富含花青素的酸樱桃提取物浓度，并参考近期讨论花青素和黄酮在人体内吸收的研究[25,26] ，研究选择了富含花青素的酸樱桃提取物浓度在1ng/μL和50ng/μL进行进一步的实验。为了显示高血糖环境与富含花青素的酸樱桃提取物的联合作用，研究将HUVECs维持在高糖水平，用富含花青素的酸樱桃提取物进行处理。 MTT实验表明，即使在48小时处理后，富含花青素的酸樱桃提取物和高糖浓度的联合使用也不会显著降低细胞活力(图1A) 。这也用尼罗河红法进行了测试，并观察到了同样的结果。而MTT根据线粒体脱氢酶活性决定细胞活力，荧光染料尼罗河红则根据极性脂质含量[21]决定相对细胞数。尼罗河红法的结果(图1B)表明，在富含花青素的酸樱桃提取物和高葡萄糖浓度同时存在的情况下，细胞活力没有发生变化。
由于早期凋亡和坏死过程的开始在上面使用的实验中无法检测到，为此，实验采用DilC1（5）法(图1C)检测早期凋亡过程，用SYTOX绿色标记检测早期坏死过程(图1D) 。虽然在高糖处理下观察到一个小的坏死过程的启动，但富含花青素的酸樱桃提取物能够防止这种情况，并且当与高糖联合使用时，在延迟的HUVECs条件下不会导致坏死或凋亡。这些结果表明，富含花青素的酸樱桃提取物和高葡萄糖浓度同时存在时，没有表现出细胞毒性作用。
文章插图
图1. 富含花青素的酸樱桃提取物和高糖同时存在时不影响人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的活力：A.MTT；B.尼罗河红实验；C.DilC1；D.SYTOXGreen检测。
03、花青素酸樱桃提取物具有良好的抗氧化作用
花青素具有的强烈抗氧化作用[27] ，研究人员为了评估富含花青素的酸樱桃提取物的抗氧化能力，结合高血糖条件以及用或不用该提取物测定ROS水平，正如预期的那样，高葡萄糖浓度导致实验中HUVECs模型中ROS水平升高，但富含花青素的酸樱桃提取物能够消除这种增量（图2），这表明该提取物具有很强的抗氧化作用[28] 。
文章插图
图2. 富花青素酸樱桃提取物降低了高血糖条件下活性氧(ROS)的产生
04、花青素酸樱桃提取物降低了促炎细胞因子的基因表达
许多研究表明，持续高血糖和炎症之间有很强的联系。促炎细胞因子分泌增加是高血糖诱导的炎症过程的一种表现[29] 。为了深入了解高血糖所致的炎症过程，该研究检测了四种促炎细胞因子，即TNF-α、IL-6、IL-8和IL-1α在高血糖条件下是否含有富含花青素的酸樱桃提取物的表达水平[30] 。首先，在基因在孵育48h后进行检测，在ROS的产生这个取样时间，实验装置检测到促炎细胞因子的表达没有明显变化。因此，研究人员通过评估7天后的表达来评估差异表达是否具有长期性。 7天后，高糖浓度显著增加，先前提到的促炎细胞因子的表达在未处理的对照组则维持在正常的葡萄糖水平（图3）。富含不同浓度（1 ng/μL和50ng/μL）花青素酸樱桃提取物均能显著抑制这种效应，但TNF-α的情况除外(图3A) ， 1ng/μL浓度的花青素酸樱桃提取物显著降低，而50ng/μL浓度下TNF-α水平高于正常血糖对照(5mM)和高血糖水平（30mM）。