质粒小量提取试剂盒常见问题与解析 _质粒提取试剂盒是一类医疗器械吗

质粒小量提取试剂盒常见问题与解析质粒小量提取试剂盒常见从1～4mL菌液可以抽提到5～30μg的质粒，纯度高，OD260/OD280比值一般为1.8-2.0之间，质粒可直接用于PCR、酶切、转化测序和体外转录等后续实验。那么在实验过程中常见问题有哪些，下面跟我一起来看一下。
质粒小量提取试剂盒质粒得率低可能原因及解决办法：

1、菌体未活化，生长效率低，菌量少。需要活化菌种。

2、属于低拷贝质粒，增加菌液的量。

3、SolutionB裂解不充分，室温静置5min 。

4、最后洗脱体积不够，洗脱液不少于50μL 。

质粒小量提取试剂盒质粒纯度差可能原因：

1、SolutionA未加入RNaseA或加入RNaseA的SolutionA 未4℃保存。

2、加入SolutionB剧烈震荡，使得基因组断裂。

3、加入BufferN操作慢，形成微小沉淀，蛋白质无法被充分漂洗干净。

4、BufferW2未加入无水乙醇。

5、OD260/OD280比值一般在1.8-2.0之间，小于1.8可能有蛋白污染，大于2.0有部分降解或RNA污染。
质粒提取试剂盒是一类医疗器械吗质粒提取试剂盒是采用碱裂解法裂解细胞，通过吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA 。提取的质粒DNA可适用于各种常规的分子生物学试验，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。并不是医疗器械。
质粒小提试剂盒中的p1 p2 p3分别有什么作用p1：葡萄糖使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA是Ca2?和Mg2?等二价金属离子的螯合剂，其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性；可添加RNase A消化RNA 。
p2：此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞，释放DNA，因为在强碱性的情况下，细胞膜发生了从双层膜结构向微囊结构的变化。SDS与NaOH联用，其目的是为了增强NaOH的强碱性，同时SDS作为阴离子表面活性剂破坏脂双层膜。
p3：溶液III的作用是沉淀蛋白和中和反应。其中醋酸钾是为了使钾离子置换SDS中的钠离子而形成了PDS，因为十二烷基硫酸钠遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾，而PDS是不溶水的，同时一个SDS分子平均结合两个氨基酸，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了。
【质粒小量提取试剂盒常见问题与解析】2M的醋酸是为了中和NaOH 。基因组DNA一旦发生断裂，只要是50-100 kb大小的片断，就没有办法再被 PDS共沉淀了，所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入，琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带。
75%酒精主要是为了清洗盐份和抑制Dnase；同时溶液III的强酸性也是为了使DNA更好地结合在硅酸纤维膜上。

扩展资料
质粒具有自主复制能力，使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。细菌质粒为DNA重组技术中常用的载体。载体，把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进受体细胞中去进行增殖和表达的工具。
将某种目标基因片段重组到质粒中，构成重组基因或重组体。然后将这种重组体经微生物学的转化技术，转入受体细胞（如大肠杆菌）中，使重组体中的目标基因在受体菌中得以繁殖或表达，从而改变寄主细胞原有的性状或产生新的物质。
参考资料来源：百度百科-质粒
参考资料来源：百度百科-质粒抽提
试剂盒提取质粒原理碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA 。在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入pH4.8乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时,共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确,而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开,复性就不会那么迅速而准确,它们缠绕形成网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA,蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
转染用质粒提取试剂盒大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA提取出来。区别：
1.大提用于大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml 。
2.一般试剂盒中大提比小提多了溶菌酶、异丙醇（回收沉淀核酸）、含一定量PEG的氯化物（回收质粒DNA）及乙酸铵等，其作用及目的都是有利于细菌的裂解和质粒的纯化，所以大提的产物比小提的量多很多，而且纯度很高。