1、阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测,PNH(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,是一种罕见的获得性克隆造血干细胞疾病 。
但近年来有增多趋势 。
我国北方多于南方 。
半数以上发生在20-40岁青壮年 。
男性多于女性 ， 与遗传及种族无关 。
本病起病隐袭缓慢 ， 呈慢性过程 ， 以贫血、出血为首发症状者较多 ， 以血红蛋白尿起病者较少,血红蛋白尿,睡眠有关 ， 早晨较重 ， 下午较轻 尿液外观为酱油或红葡萄酒样;
伴乏力、胸骨后及腰腹疼痛、发热等,原因,因为补体作用最适宜的pH是6.87.O ， 而睡眠时呼吸中枢敏感性降低 ， 酸性代谢产物积聚,研究历史,Strubing第一次报道PNH Ham 和D 。

2、ingle 证明了PNH 患者的红细胞在血清酸化条件下 ， 易发生溶血 ， 这就是现在普遍使用的Ham 实验 1983年证实PNH患者GPI合成异常 1993年pig-a基因突变,流式细胞术,原理： X染色体上PIG-A（造血干细胞经获得性体细胞基因）突变 导致糖化肌醇磷脂(GPI)锚合成障碍 导致由GPI锚接在细胞膜上的一组膜蛋白丢失 ， 包括CD16、CD55、CD59等,GPI锚连接蛋白,补体调接蛋白 衰变加速因子(DAF或CD55)、膜攻击复合物抑制因子(MACIF或MIRL或CD59)、补体C8结合蛋白(HRF或C8bp)、膜辅助蛋白(MCP) 。
粘附分子 淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3或 。

3、CD58)、 Blast-1/ CD48、CD67、CD66,GPI锚连接蛋白,酶类 红细胞乙酰胆碱脂酶 ( AchE )、中性粒细胞碱性磷酶酸酶 ( NAP )、5外核酸酶 ( CD 73 ) 。
受体类 中性粒细胞III型Fc受体 ( FcRIIIb 或CD16 )、单核细胞分化抗原 ( CD14 )、尿激酶型纤溶酶原激活物受体 ( u-PAR ) 。
血型抗原 CD55 携带的Comer抗原、AchE携带的 Yt抗原,1型细胞 CD59完全阳性,补体激活途径,C1 C1 C2,C4 C4b2b (C3转化酶） C3 C3b P （备解素） PC3bBb C3bB (C5转化酶） C4b2b3 。

4、b或PC3bBb C8 C9 C6C7 C5 C5b C5b678 C5b-9 (MAC,CD59,替代途径,经典途径,CD55,Ag-Ab,分析,1.红系及粒系FSC/SSC设门 报告标本中CD55、CD59阴性比例,做2030份正常人血样划定阳性区（区）范围 同型阴性对照界定区范围 ，中间的区域即为区,根据CD59可以将PNH细胞分为3型 1型细胞 CD59完全阳性 正常细胞 2型细胞 CD59部分阳性 补体中度敏感细胞 3型细胞 CD59完全阴性 补体敏感细胞,CD55和CD59同时部分或完全缺失是PNH的典型表现 ， 单GPI缺失不能确诊 。
CD59重要性大于CD55 单CD55缺乏时并不 。

5、因此改变红细胞对补体的敏感性而造成溶血 CD59的缺失会增加补体的敏感性 临床上以CD59缺失作为诊断标准是一个趋势 。
解决了一切以补体溶血为基础的实验诊断方法在诊断PNH的不确定性,意义,其它细胞的PNH检测,PNH患者的红细胞、粒细胞、单核细胞及淋巴细胞上GPI锚连膜蛋白部分或全部丧失 。
粒细胞单核细胞淋巴细胞红细胞 骨髓PNH克隆出现比外周血早 ， 网织红细胞略早于红细胞,其它细胞的PNH检测,应用FSC/SSC设门分析时会有许多脱颗粒的中性粒细胞 ， 这时只使用物理特征无法准确设定粒细胞门了 ， 这时必须使用系列标志/SSC设门:CD15 ， CD33。
CD64设门 ， 分析单核CD14,CD55,C 。

6、D59 ，PNH病人检测GPI缺乏的血小板不容易分辨 不能只根据淋巴细胞上GPI相关蛋白的表达来诊断,与其他实验比较,1.酸溶血试验(Ham试验) 患者红细胞与含5%盐酸的正常同型血清混合 ， pH6.4 ， 37孵育2小时 ， 溶血明显 。
本试验特异性高 ， 敏感性差 。
2.蛇毒因子溶血试验蛇毒因子能通过补体交替途径 ， 使补体敏感的红细胞发生溶血 。
本试验特异性强 ， 敏感性优于酸溶血试验 。
3.热溶血试验和蔗糖溶血试验 因特异性差 ， 常作为筛选方法,具有PNH克隆的血液病,检测粒细胞GPI 锚连蛋白表达 病种 检测例数 缺失例数( % ) AA 115 25 ( 22 % ) MDS 39 9 ( 23% ) 并发现 。

7、 MDS有 PNH表达者 ATG（人胸腺细胞免疫球蛋白）治疗有效 ( An Intern Med 1999 ， 131: 401,PNH和AA关系,相当密切 ， 可以相互转化且并存 AAPNH较多(15%) ， PNHAA少 20%30% PNH可伴骨髓再障 AA(ATG治疗后)PNH 1031% AA-PNH综合征 16.5%(我国) 50%AA外周血或骨髓可检出PNH克隆 AAPNH 生存率要高于PNHAA MDS-RA 如捡出PNH克隆者预后好 ， 且ATG(人胸腺细胞免疫球蛋白)治疗有效 。
PNH对AA和MDS的“自然治疗” ， 而“AA救了PNH”,PNH 克隆见于淋巴增殖性疾病,检测病种 例数 NHL 。

8、 87 HD 55 红细胞 CD55/CD59 CLL 49 缺失检出率 9.2% ALL 22 HCL 4 (Hematol J 2001 ， 2: 33,PNH克隆见于浆细胞病,检测红细胞 CD55/CD59 缺失 病种 检测例数 缺失例数 (%) MM 62 6 WM 7 2 MGUS 6 1 HCD 2 1 合计 77 10 (12.9%) (Int J Hematol 2002, 75 :40,FLAER,嗜水气单胞菌溶素变异体(FLAER) 。
1998年Diep等报道嗜水气单胞菌(HEC)毒素能特异地与细胞膜上GPI锚连蛋白结合 ， 随后立即聚合成多具体 ， 插入细胞膜脂质双层 ， 在膜上形成孔洞 。

【PNH|PNH-阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测课件】9、致溶破 。
PNH细胞缺乏GPI蛋白而抵抗毒素保持细胞完好,FLAER,FLAER在所有具有GPI锚连蛋白的白细胞上都有特异性表达 ， 所以正常人及非PNH贫血FLAER成100%阳性 。
是目前诊断PNH最敏感、特异的方法 。
FLAER对PNH克隆检出的敏感性为0.1% ， 其它靶向标记检出率的敏感性为1,结果分析,1.设门 CD45/SSC 2.标记CD15 ， CD14 ， CD45 ， FLAER 检测PNH粒、单核及淋巴细胞 ， 报告标本中各系细胞FLAER阴性比例,FLAER,目前FLAER一般用于有核细胞的检测 ， 不能评价红细胞的PNH克隆 。
由于红细胞表面没有气单胞菌溶素前体产生所需要的蛋白水解酶类 ， 尽管表达在红细胞表面的血型糖蛋白不是锚连蛋白 ， 但是由于血型糖蛋白与气单胞菌溶素前体结合力较弱 ， 因此限制了FLAER在红细胞中的应用,PNH-阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测,35,与CD55、CD59比较 ， Flaer对PNH患者对中性粒细胞的测定最为清晰、准确 临床上高度怀疑 ， 而CD55、CD59不能确诊的病例 ， 可以结合F1aer检查 ， 获得明确诊断,PNH-阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测,36,谢谢 。

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标题：PNH|PNH-阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测课件