1527年，德意志西班牙联军击败在意大利境内的法军。将其赶出意大利，但是因得不到应得的军饷。有34000人的帝国军队哗变，强迫军队司令波旁公爵、前任法国陆军统帅——查理三世·德·波旁（此人本是法国统帅，但因为弗朗索瓦一世的母亲强占波旁家族的遗产，愤而逃走，投奔查理五世帕维亚会战即由此人指挥）带领他们向罗马进发。不少土匪及同盟军的逃兵也在半途加入了他们的队伍中。5月5日抵达罗马城墙下。


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查理三世·德·波旁
叛军围攻罗马城，此时罗马的守军不多，仅有民兵5000人及教皇的瑞士卫队。主帅查理公爵希望尽快攻破罗马，避免遭受守军及法军夹击的可能性。5月6日，帝国军队进攻贾尼科洛山及梵蒂冈山的城墙。主帅查理公爵中了致命的枪伤，不久即死亡。帝国军同日攻占城墙。在圣伯多禄大殿的台阶上，教皇的瑞士卫队几乎全部战死，当值的189人中，仅有42人生还。瑞士卫队的奋勇作战，使教皇得以经秘密通道安全逃出。叛军进程，烧杀抢掠，无恶不作，将罗马洗劫一空，一万多人被杀，数万人逃亡，不久，罗马又因死者未及时处理爆发瘟疫，尸横遍野，这就是著名的“罗马之劫”，曾经富裕的罗马城，教皇的所在地变成一片废墟，可以说，影响极其恶劣。许多历史学家认为，此事件标志者文艺复兴全盛期的结束，听闻美第奇家族在教皇国的彻底失败后，佛罗伦斯共和国起兵推翻美第奇家族，再度恢复“真正的共和民主制度”。


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罗马之劫
走投无路的教皇克雷蒙七世表示降服，被囚禁在罗马圣天使城堡。克雷蒙七世受挫，引起了人们半宗教，半政治的同情，国王们纷纷向查理五世施加压力。1527年后查理五世控制了教宗克莱孟七世，两方在1529年签下《康布雷条约》，结束科涅克同盟战争并达成和解，让查理在1530年被正式加冕为神圣罗马皇帝兼意大利国王，从此也没有一个皇帝能够身兼意大利国王了；交换条件是查理出兵克莱孟七世的家乡佛罗伦斯共和国，帮助克莱孟七世出身的美地奇家族恢复统治，于是美弟奇在查理的出兵下重回佛罗伦斯（西军攻破城墙、杀死许多共和派领袖），而克莱孟七世的私生子亚历山德罗·德·美弟奇在隔年成为了佛罗伦斯的世袭公爵。伤感于佛罗伦斯共和国灭亡、“祖国之民主共和”已死的佛罗伦斯大师米开朗基罗带着极大的悲痛和不幸，永远地离开了佛罗伦斯这块伤心地。终身未再返回。科涅克同盟作鸟兽散。失去意大利城邦的支持，法国无力在意大利继续作战。1530年之后，意大利半岛几乎不再有大型战役，西、法两强的争霸集中在法国的边境领土，之后的意大利战争只是挂名意大利，实际战场几乎都在意大利本土之外的西欧、中欧和地中海地区。

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