『黑色素瘤』cfDNA定量检测——黑色素瘤篇
文章图片
文章图片
文章图片
文章图片
由于活检样本的大小或无法进行活检 ， 肿瘤组织活检有时会受到限制 ， 实体瘤的分子标志物检测变得至关重要 。 在这种情况下 ， 血液中源自癌细胞的无细胞DNA（cfDNA）可以作为癌症诊断生物标志物 。
【『黑色素瘤』cfDNA定量检测——黑色素瘤篇】今天给大家带来的一篇发表于PLOS ONE杂志上的文章 ， 关于cfDNA定量检测用于黑色素瘤诊断的研究探讨 。
论文作者对76名黑色素瘤患者和63名健康对照者测试了cfDNA 总 浓度、cfDNA完整性、BRAF- V600E 突变和与cfDNA中的RASSF1A启动子甲基化水平 ， 发现标记物联合检测 ， 与每个单独的标记物相比 ， 可提高诊断黑色素瘤的能力 。
cfDNA总浓度和cfDNA完整性
研究表明 ， 癌症患者比健康个体具有更高的cfDNA浓度 。 cfDNA的浓度受肿瘤细胞数目 ， 肿瘤大小 ， 瘤灶总数的影响 。 另一方面 ， 血浆DNA水平升高并不是特定的癌症标志物 ， 因为在癌前阶段 ， 炎症或外伤的患者中也观察到这种现象 。 cfDNA的总浓度作为早期癌症检测的标志物成为了医学研究的一个方向 。
在实体癌中 ， 由于核酸酶的随机消化 ， 细胞凋亡或者坏死会产生一系列大小可变的DNA片段 。 相反 ， 正常血液中有核细胞的细胞死亡主要是通过凋亡产生的 ， 而凋亡会产生小的且均匀的DNA片段 。 在患有多种肿瘤疾病的患者中通常观察到血浆DNA的片段比健康的受试者更长 ， 这反映在DNA完整性指数的增加上 。
cfDNA总浓度和完整性的提高是绝大多数人类实体癌所共有的可以视为非特异性生物标记 。
外周血cfDNA总浓度和完整性区分黑色素瘤患者和健康对照组：
cfDNA总浓度对比图（左为黑色素瘤患者cfDNA总浓度水平）
DNA长片段浓度对比图（左为黑色素瘤患者DNA长片段浓度水平）
BRAF-V600E突变
在黑色素瘤中 ， 致癌基因BRAF经常发生突变 。 BRAF是一种参与AS–RAF–MEK–ERK途径的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶 ， 它调节细胞的生长 ， 存活 ， 分化和衰老 。
致癌基因BRAF经常在其他人类癌症中发生突变 ， 从而组成性地激活MAPK途径 。 最常见的BRAF突变是T1799A突变 ， 大约有90％的携带BRAF突变的癌症患者癌细胞中发生了这种序列的改变 ， 使得V600E位置上的缬氨酸转化为谷氨酸 。 据报道 ， 66％的黑色素瘤患者存在BRAF体细胞突变 ， 可能是启动黑色素细胞瘤形成的关键因素 。 BRAF突变贯穿了整个黑色素瘤的发生和发展 ， 成为了临床诊断治疗的研究热点 。
cfDNA中BRAF -V600E浓度区分黑色素瘤患者和健康对照组：
BRAF-V600E浓度对比图（左为黑色素瘤患者BRAF-V600E浓度水平）
RASSF1A启动子甲基化水平
表观遗传学上的失调也是黑色素瘤发病机制之一 。 RASSF1A（Ras关联结构域家族1亚型A）是一种抑癌基因 ， 可调节有丝分裂 ， 细胞周期和细胞凋亡 。 大多数类型的癌症发生是因为启动子被甲基化而失去表达活性 。 55％的黑色素瘤患者检测到RASSF1A启动子被甲基化 。 RASSF1A的甲基化水平随着临床晚期的发展而显着增加 ， 表明该基因的失活与肿瘤的进展有关 。 治疗反应较差和总体生存率降低的黑色素瘤患者的cfDNA中检测到RASSF1A启动子甲基化程度过高 。