1、实验原理:磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下易被酚类化合物还原而呈蓝色反应 。因蛋白质中含有代酚基的酪氨酸,故有此反应;
2、实验试剂:将百分之四浓度碳酸钠溶液,百分之二浓度氢氧化钠溶液等体积混合;将百分之一浓度硫酸铜溶液,百分之二浓度酒石酸钾钠溶液等体积混合 。再将配置好的两溶液以五十比一的体积比混合,当天使用 。
lowry法测蛋白质原理lowry法测蛋白质原理如下:
实验原理:磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下易被酚类化合物还原而呈蓝色反应 。因蛋白质中含有代酚基的酪氨酸,故有此反应 。
Lowry法最早是由Lowry确定蛋白质浓度测定的基本步骤,以往在生物化学领域中广泛应用 。Lowry法的显色原理是根据双缩脲反应,蛋白质中的肽键在碱性条件下与Cu2+反应,生成紫红色Cu+复合物 。
Folin酚试剂在Cu+的催化下,磷钼酸-磷钨酸盐被蛋白质中的芳香族氨基酸残基还原,产生深蓝色的钼蓝和钨蓝混合物,其最大吸收峰在745~750nm处 。在一定的浓度范围内,所形成蓝色的深浅与蛋白质含量之间有线性关系,可用于蛋白质含量的测定 。
【什么是蛋白质测定的Lowry法】在蛋白质混合物经过粗分离、纯化后,可以得到目的蛋白 。蛋白分离公司提供的蛋白的粗分离服务首先是使用蛋白质提取缓冲液提实验材料,由于蛋白提取中目标蛋白质的浓度往往较低,需要采取一些简单的方法使目标蛋白浓缩,同时去除大量的杂质 。
然后根据蛋白质分子大小、分子性状、分子表面特征或分子带电状况进行进一步纯化,也就是蛋白质的细分级 。在蛋白分离纯化后,使用Lowry法测重组蛋白的含量 。美迪西提供蛋白分离服务,可以根据客户要求,承接从mg到kg级的化合物纯化分离服务 。
bradford法和lowry法是什么法bradford和lowry两者都是生物检验的化学试剂 。
bradford法,也称考马斯蓝染色法(coomassie blue staining) 。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种 。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在 465nm,后者在595nm 。在一定蛋白质浓度范围内(0~100μg/ml),蛋白质-色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比 。故可用于蛋白质的定量测定 。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速,其结合物在室温下1h内保持稳定 。该反应非常灵敏,可测微克级蛋白质含量,所以是一种比较好的蛋白质定量法 。
Lowry法是双缩脲法和福林酚法的结合与发展,其原理是:蛋白质溶液用碱性铜溶液处理,形成铜-蛋白质的络合盐,再加入酚试剂后,除使肽链中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等显色外,还使双缩脲法中肽键、碱性铜的显色效果更强烈 。因此,Lowry法的显色效果比单独使用酚试剂强烈3~15倍,为双缩脲法100 倍 。由于肽键显色效果增强,从而减小了因蛋白质种类引起的偏差 。Lowry法的试剂由两部分组成,试剂甲相当于双缩脲试剂(碱性铜溶液),可与蛋白质中的肽键起显色反应;试剂乙为磷钨酸和磷钼酸混合液,在碱性条件下极不稳定,易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物而呈蓝色反应,因此蛋白质的酪氨酸和胱氨酸等可显色,颜色深浅与蛋白质含量成正比 。
Lowry法蛋白定量是什么?就是folin-酚法,这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一 。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难,近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代 。最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤 。详细试剂的配制以及实验步骤见百科 。
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