凝胶过滤层析的原理是什么? _凝胶层析的应用

凝胶过滤层析的原理是什么?

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凝胶过滤层析的原理是利用具有多孔网状结构的颗粒的分子筛作用，根据被分离样品中各组分相对分子质量大小的差异进行洗脱分离，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。
凝胶层析的应用

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⑴脱盐：高分子（如蛋白质、核酸、多糖等）溶液中的低分子量杂质，可以用凝胶层析法除去，这一操作称为脱盐。本法脱盐操作简便、快速、蛋白质和酶类等在脱盐过程中不易变性。
适用的凝胶为SephadexG-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6 。
柱长与直径之比为5-15 ，样品体积可达柱床体积的25%-30% ，为了防止蛋白质脱盐后溶解度降低会形成沉淀吸附于柱上，一般用醋酸铵等挥发性盐类缓冲液使层析柱平衡，然后加入样品，再用同样缓冲液洗脱，收集的洗脱液用冷冻干燥法除去挥发性盐类。⑵用于分离提纯：凝胶层析法已广泛用于酶、蛋白质、氨基酸、多糖、激素、生物碱等物质的分离提纯。凝胶对热原有较强的吸附力，可用来去除无离子水中的致热原制备注射用水。⑶测定高分子物质的分子量：用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内，在同一条件下层析，记录每一种成分（已知分子量的标准品）的洗脱体积，并以洗脱体积对分子量的对数作图，在一定分子量范围内可得一直线，即分子量的标准曲线。
测定未知物质的分子量时，可将此样品加在测定了标准曲线的凝胶柱内洗脱后，根据物质的洗脱体积，在标准曲线上查出它的分子量。⑷高分子溶液的浓缩：通常将SephadexG-25或50干胶投入到稀的高分子溶液中，这时水分和低分子量的物质就会进入凝胶粒子内部的孔隙中，而高分子物质则排阻在凝胶颗粒之外，再经离心或过滤，将溶胀的凝胶分离出去，就得到了浓缩的高分子溶液。
比较凝胶层与纸层析在实验原理上的区别

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凝胶层析与纸层析区别为：载体不同、原理不同、预处理不同。一、载体不同1、凝胶层析：凝胶层析的载体为是由胶体溶液凝结而成的固体。
2、纸层析：纸层析是用纸作为载体。
【凝胶过滤层析的原理是什么?】二、原理不同1、凝胶层析：凝胶层析的原理为分子筛效应，在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶颗粒内部的多孔网状结构，流速缓慢，以至最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。2、纸层析：纸层析其应用的原理是相似相溶原理，是通过分裂系的在同一介质中分散速度不同来分析的。三、预处理不同1、凝胶层析：凝胶层析必须于使用前在过量的溶剂中充分地膨胀。2、纸层析：纸层析无需进行预处理。
比较凝胶层析与分配层析在实验原理上的区别

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比较凝胶层析与分配层析在实验原理上的区别：含义不同，作用力不同。一、作用力不同：所有的层析在原理上都是相通的，区别在于流动相和层析剂之间的作用力的不同。
离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。
二、含义不同：离子交换是利用蛋白质表面的电荷与层析剂上的离子基团的静电作用。凝胶过滤层析利用了凝胶的多孔性，根据溶剂分子的大小进行分离。原理单个凝胶珠本身象个"筛子" 。不同类型凝胶的筛孔的大小不同。