干货：反义lncRNA分子模型及实验方法( 二 ) ：干货：反义lncRNA分子模型及

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那反义RNA是如何延长mRNA的半衰期的呢？作者将目光转移至重叠区（OL），通过构建lncRNA全长、仅包含OL、去除OL的三种类型，在目的细胞分别过表达：

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得出， OL增加了KRT7蛋白表达量，是lncRNA的最短功能区。也就是KRT7-AS通过与KRT7形成RNA-RNA双链形式，增加了后者的半衰期，从而增加了蛋白表达量。进一步将上述质粒进行细胞学功能验证，也发现同等结果，即OL过表达促进了GC细胞的增殖和迁移。

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AS-lncRNA充当“支架”以改变mRNA的半衰期肺腺癌（LUAD）是非小细胞肺癌的组织学子类别，占全球与癌症相关的死亡的很大一部分。 ZFPM2-AS1可以促进LUAD细胞的增殖，侵袭和上皮间质转化，是如何实现其分子机制的呢？
首先在LUAD细胞中ZFPM2-AS1过表达和敲低后， ZFPM2表达呈现相反的现象：

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通过FISH实验，确认了lncRNA定位胞浆中：

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下拉实验，通过质谱分析与ZFPM2-AS1互作的蛋白质。发现了UPF1（UPF1是RNA降解途径中的关键调控因子，可诱导mRNA衰变）。

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那么ZFPM2-AS1对ZFPM2的负反馈调节，是否是因为前者吸附了UPF1 ，导致后者降解效应解除呢？
通过Starbase ，确定了UPF1的3'非翻译区（3UTR）上的潜在结合位点。然后，将3UTR区插入MS2质粒中进行了MS2-RIP 。分析证实UPF1和ZFPM2-AS1与ZFPM2mRNA在3'UTR区域的预测位点的相互作用。此外，加入放线菌素D来阻断mRNA的产生，每隔4小时检测ZFPM2mRNA的水平。结果表明过表达UPF1或ZFPM2-AS1会缩短ZFPM2mRNA的半衰期。
【干货：反义lncRNA分子模型及实验方法】

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这些结果表明ZFPM2-AS1与UPF1协同作用来破坏ZFPM2mRNA的稳定性。

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AS-lncRNA通过与5UTR互作调控基因表达RBM15是巨核细胞（MK）分化的调节剂，其上调增强MK末端分化，而RBM15-AS1敲低则减弱了MK末端分化。为了阐明内在机制，作者首先分析两者的序列，发现RBM15-AS1的外显子1跟RBM15的5UTR是重合的：

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进一步寻找lncRNA的主要功能区，构建全长以及多个截断型，发现5端是主要功能区，可促进分化：

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再验证RBM15-AS1与RBM15的关系，表明前者的最短功能区外显子1可引发后者翻译水平的提升，但是mRNA水平没有明显变化，这点跟前述半衰期是类似的。

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通过将RBM15的5UTR构建双荧光素酶报告系统，再跟lncRNA不同截断型共表达，确认了重叠区对翻译的促进作用：

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5UTR的双链RNA结构增强翻译是受SINEB2元件（上调翻译的SINE元件），这一点AS‐Uchl1以不依赖于CAP的方式调控Uchl1的翻译已经论述过，所以本文没有赘述。
AS-lncRNA调控转录剪接脑组织中SORL1变体A表达降低，会促进神经毒性β-淀粉样肽（Aβ）形成的增加，从而导致阿尔茨海默氏病（AD）。研究发现，该过程与SORL1内含子1的非编码反义lncRNA-51A相关。 51A的高表达干扰SORL1pre-mRNA剪切，减少对变体A的表达，而增加了其他同工型的数量。

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M为对照， 51A是过表达lncRNA组；上图为SORL1不同变体的表达量，下图为对应的Aβ表达量
LncRNA-51A通过与SORL1pre-mRNA碱基配对而掩盖了剪接位点，从而导致变体A减少（更多实验由于篇幅有限，实验策略基本同前述研究，感兴趣请看原文）。
总结AS-lncRNA涉及的功能模型
由此可见， AS-lncRNA与相邻的编码基因功能密切相关，可以以多种方式调节亲本基因的表达。对于AS-lncRNA的实验研究：高通量测序、过表达、敲低、体外转录、质谱分析等实验内容，吉凯基因可以一站式解决，助力科研工作者对AS-lncRNA的研究，快来咨询吧！！！