Nature Methods：刊发全新的circRNA的下调方法( 二 ) ：NatureMethods：刊发全新的

虽然CRISPR-Cas13已经被用于敲低RNA ，但是其在circRNA领域的应用之前还没有被开发。本文通过大量的实验证明了CRISPR-Cas13用于circRNA敲低的特异性，基本不影响亲本mRNA的表达，通过点突变实验也证明了gRNA种子区严格互补对于circRNA有效敲低的重要性，这也表明了CRISPR-Cas13更低的脱靶的可能性。这项研究为我们后续研究circRNA的功能提供了一个重要的工具。
思考
本文结果显示RfxCas13d拥有更高的circRNA敲低效率，其结果和Konermann在18年发表在Cell上的研究结果一致。因此，我们猜测RfxCas13d将来可能会成为RNA调控领域最重要的蛋白。并且，在Konermann的文章中， RfxCas13d融合NLS（CasRx ，融合核定位序列的RfxCas13d）之后能够很好的定位在细胞核中，且能够有效敲低定位于细胞核内的LncRNA 。我们有理由相信，通过NLS融合的RfxCas13d ，可以有效敲低一些核定位的circRNA ，而不必利用CRISPR-Cas9或者ASO 。进一步地，考虑到RfxCas13d的更小分子量（~912aa），可以比较容易地包装进AAV病毒，将其应用到体内进行敲低实验也具有非常高的可行性。
需要注意的是， RNA靶向的Cas蛋白都被报道或多或少拥有部分反式切割的活性，因此其安全性和对细胞整体水平RNA的影响仍需要进一步评估。
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