Nat Biotech | 在酵母中使用CRISPR/Cas9实现DNA序列变体文库的高哈佛Alejandro Chavez组和George Churc

责编丨小程

2018年5月21日，

哈佛大学的

Alejandro Chavez

组和George M Church组在Nature Biotechnology上在线发表了题为

“
High-throughput creation and functional profiling of DNA sequence variant libraries
”
的文章。文章报道了
在酵母中使用CRISPR/Cas9实现DNA序列变体文库的高通量创建和功能分析

的方法

。

对于理解基因组功能，

大型遗传变异文库的构建和表征

至关重要，但仍然具有挑战性。文章介绍了一种基于Cas9的方法，用于在酵母中产生具有特定基因改变

（缺失、替换、插入）

的突变体库，效率为

80-100％

，以及跟踪其整体健康状况的方法。

该研究对DNA解旋酶SGS1的小而遍布全蛋白序列的缺失突变体和针对高度保守残基的一系列点突变实施表征，证明了前述方法的实用性。此外，研究者还创建了一个全基因组文库，针对分布在整个酵母基因组中的

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个性能不佳的小开放阅读框，评估了哪些小开放阅读框对于在各种环境条件下生长至关重要。此策略允许以

高通量

的方式精确地研究基础生物学问题。

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