必看 | 上级决定了,让你去「凋亡」?

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凋亡也被称为「细胞程序性死亡

,是一种清除机体自身细胞的过程。这一点和坏死引起的细胞死亡不同。凋亡是一种由外部因素和细胞内因素影响而产生的生理过程。

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其实凋亡过程从开始到最后,在形态学和分子生物学等不同层面都有表现特征,现在基本上都有商品化的试剂盒可以选择哦。

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内在凋亡途径可能通过紫外线、病毒感染或细胞膜损害等因素诱发,可以引起细胞色素 c 释放到胞浆中,引起凋亡启动酶 Caspase-9 的激活,从而激活效应 Caspase-3,-6 和 - 7。

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Caspase-3/7 是凋亡的一系列分子事件中的核心标志物,因此成为了凋亡的分子检测的重要靶标。Caspase-3/7 平时是未激活状态,而一旦被上游的凋亡启动酶如 Caspase-8 激活,就会具有活性且剪切下游的其他蛋白从而启动后续的凋亡步骤。

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相比传统的荧光法,

Promega 专利的发光法 Caspase-3/7 检测

有明显的优势。没有荧光法的背景荧光,灵敏度更高。

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Caspase-3/7 的发光检测为均质法,不需要繁琐的清除培养基和细胞清洗,直接加入指定量的试剂,简单混合后即可进行检测。无需额外孵育时间。

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使用专利的改进型萤光素酶, 信号持续稳定长达 3 小时,对于大批次的样品可以连续处理再进行检测,且检测设备无需进样器。

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基于发光法的 cas 检测可以和其他诸如荧光法的细胞活力、毒性检测试剂盒叠加使用,从同一样品中获得更为丰富的凋亡、活力和毒性数据。避免样品间误差带来的影响,同时工作量也会大大减轻!

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LN-18 细胞经过 Staurosporine 处理后,使用 MultiTox-Fluor 荧光多重细胞毒性试剂盒 + Caspase-Glo 3/7®发光检测试剂盒检测,可以看出,随着药物浓度增加,细胞活力降低,凋亡随毒性同步增加,提示这种药物对细胞的毒性作用主要来自于诱导凋亡。

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Apo-ONE 荧光 caspase-3/7 检测,使用罗丹明 110 衍生底物被 caspase3/7 切割后释放出的罗丹明 110 发出激发荧光。试剂盒也采用了加样 - 混合 - 检测的模式,同时由于对底物进行了改良因此灵敏度大大优于现有的荧光 caspase 检测。

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CaspACE FITC-VADFMK 原位标记物是一种泛 Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 的荧光类似物,FITC 取代了 N - 端的卞酯基,这使得该类似物进入细胞后会不可逆的与 Caspase 结合,因此可以进行 caspase 酶的原位检测。

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文章来源:Promega

题图来源:Promega