韩春雨|推翻韩春雨的研究成果，Ago蛋白编辑技术重出江湖！核糖核酸|基因编辑|河北科技大

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撰稿 | 不语
编排 | 鱼儿自己
校对 | Later
基因编辑是一种通过靶向修饰改造基因组的新技术。自发现以来， CRISPR/Cas9系统已成为基因组编辑库中最强大的工具之一。尽管CRISPR/Cas9系统受到研究人员的高度赞赏，但它也有其不完善之处。 CRISPR/Cas9系统对目标识别的几种脱靶活性和PAM要求限制了其在某些基因组序列中的应用。因此，寻找新的基因编辑方法仍然是一个热门话题。除了Cas9 蛋白家族外，有研究报道Argonaute (Ago)蛋白家族，包括TtAgo和PfAgo ，也具有一定的基因编辑能力。
在原核生物和真核生物中都发现Ago蛋白。在真核生物中， Ago蛋白是RNA诱导的沉默复合物 (RISC)的重要组成部分。真核生物Ago蛋白在RNA干扰(RNAi)、microRNA和piRNA介导的转录后沉默中起着至关重要的作用。一些原核的Ago蛋白，如TtAgo和PfAgo ，可以诱导外源基因（外源质粒或噬菌体）在gDNA的指导下降解。然而， TtAgo和PfAgo通常在65 °C左右发挥作用，限制了它们在哺乳动物细胞中的应用。
据报道，来自古生菌（Natronobacterium gregoryi）的NgAgo是一种与TtAgo和PfAgo具有高度同源性的新Ago蛋白，可以在37°C下诱导由短 DNA引导的目标DNA降解。然而，其他实验室无法证实最初论文中报告的NgAgo-gDNA编辑 DNA实验结果。毫无疑问， NgAgo可以降低目标蛋白的表达。然而，基因编辑活动是难以捉摸的，最初的研究显示对 DNA 目标进行基因编辑，随后的所有研究都只观察对RNA 的基因编辑。
几项研究表明， NgAgo 可以作为DNA引导的内切核糖核酸酶发挥作用，以靶向方式切割RNA 。 NgAgo-gODN系统可以切割编码人类DYRK1A基因外显子11的 RNA 转录本。另一项研究表明， NgAgo-gDNA系统通过加速基因组RNA的衰变有效抑制乙型肝炎病毒的复制。尽管如此，在他们的研究中还没有确定切割位点。此外， NgAgo在分散在gDNA互补序列中的位点切割 RNA ，该结果尚未得到其他研究的证实。
2021年7月23号，华中科技大学罗迪贤及南华大学胡政共同通讯在Molecular Biotechnology (IF=2.69)在线发表了题为Identification of a Novel Cleavage Site and Confirmation of the Effectiveness of NgAgo Gene Editing on RNA Targets的研究论文。
在本研究中， NgAgo在RNA中的靶标在体外和体内得到证实。然后，设计了体外RNA切割系统，并通过测序验证了切割位点。此外，将NgAgo和gDNA转染到细胞中以切割细胞内靶序列。我们在体外和体内证明了NgAgo以gDNA依赖性方式靶向降解 GFP、HCV 和 AKR1B10 RNA ，但未观察到对 DNA 的影响。测序表明切割位点位于目标 RNA 的3' ，被 gDNA 的 5'序列识别。这些结果证实NgAgo-gDNA切割的是RNA而不是 DNA 。我们观察到切割位点位于目标RNA的 3' ，这是过去未报道的新发现。
而恰巧的是，河北科技大学韩春雨在Nature Biotechnology发表的研究论文就是使用Ago蛋白进行基因组编辑。
韩春雨事件的时间线：
2016年5月8日，多家媒体以一鸣惊人为题，先后报道韩春雨的论文成果；2016年5月27日，首个声称未能重复韩春雨实验的帖子在未名空间BBS出现，作者据称来自中科院上海分院；2016年7月13日，韩春雨当选为河北省科协副主席，并在当月被河北科大推荐为“长江学者奖励计划”候选人。
2016年7月21日，中科院神经所研究员仇子龙发表声明，称能在基因组水平看到NgAgo引起的基因编辑，并呼吁韩春雨尽快发布NgAgo 2.0版和Smart版；2016年7月29日，澳大利亚科学家Gaetan Burgio发表长文，表示不能重复韩春雨论文中图4的结果；2016年8月2日， Nature Biotechnology首次对争议表态， “已有若干研究者联系本刊，表示无法重复这项研究。本刊将按照既定流程来调查此事”；8月9日，韩春雨应公益组织Addgene要求，发布新版的protocol 。
2016年10月10日，北京大学分子医学研究所教授熊敬维，北京大学生命科学学院研究员孙育杰，中科院动物研究所研究员王皓毅、李伟等13位中国生物学家联名在媒体上公开发声，表示无法重复该实验结果，呼吁有关部门启动学术调查；2016年10月14日，河北科技大学向媒体提供一份题为《关于舆论质疑韩春雨成果情况的回应》的书面材料，表示学校对此事一直给予积极关注；2016年11月19日， Nature Biotechnology发表线上声明，无法实现NgAgo基因编辑功能，并对韩春雨论文表达编辑关切，设定2017年1月为期限，限作者予以澄清说明。