全自动血球计数仪血球计数仪 _全自动

血细胞计数器(自动血细胞计数器)
看滑动解释！
01清洁实验环境
在层流安全柜内彻底喷洒消毒剂，并用纸巾擦拭。将Youyou.com用过的纸巾放入适当的垃圾桶。
向安全柜内喷70%乙醇，用纸巾擦拭。安全柜现在已经清洁，可以使用了。
02细胞悬浮液的处理
从冰箱中取出细胞培养基和胰蛋白酶，放入37℃的二氧化碳培养箱中升温。
用显微镜观察要计数的细胞，检查是否有可见的细菌和真菌污染迹象。
用70%乙醇喷洒培养基瓶和移液管，并将其放入安全柜中。
轻轻摇动培养基瓶，确保悬浮细胞充分混合。
在悬浮细胞沉淀之前，取0.5 ml细胞悬浮液样品，并将其储存在无菌微量离心管中。
去除粘附细胞上的残余培养基。
室温下用DPBS溶液洗涤，加入EDTA胰蛋白酶分离细胞(DPBS溶液和蛋白酶用量见表) 。
在37℃的二氧化碳培养箱中放置2~5分钟。(培养时间取决于细胞类型) 。
取出后在倒置显微镜下观察。发现细胞突起回缩，细胞间间隙增大，细胞从培养瓶底部分离成单个细胞。
所有细胞分离后， EDTA胰蛋白酶在含10%胎牛血清的培养基中于37℃中和(见剂量表) 。

上下摇动细胞悬液三次，使细胞复活，然后转移到15 ml试管中。
在室温下以每分钟1000转的速度离心细胞悬浮液5分钟。
离心后，弃去细胞悬浮液。
然后，用含10%胎牛血清的培养基在37℃下将细胞颗粒悬浮至原始培养体积。
用5ml无菌移液管吸取0.5ml细胞悬液样品，转移至无菌微量离心管中。
03准备血细胞计数器。
如果使用玻璃血细胞计数器和盖玻片，请在使用前用酒精清洗。用水弄湿盖玻片，并将盖玻片固定在血细胞计数器上。如果盖玻片下出现牛顿折射环，说明盖玻片已经贴好。
如果使用的是一次性血细胞计数器(如INCYTO DHC-N01) ，请在使用前将其从包装中取出。
开始数数。
取100 L细胞于新的微量离心管中，加入400 L 0.4%台盼蓝(终浓度0.08%) ，轻轻混合。
小心地将一滴悬浮液滴入计数室的孔中，以便通过毛细管作用吸入细胞悬浮液。
使用倒置显微镜，在10x物镜下聚焦血细胞计数器的4*4网格线。计数未染色的活细胞。
计数时，只计算框内或右下边界线上的单元格。
按照同样的，必要时可以通过计算大班优优资源网蓝染色的死细胞数来估算活细胞的比例。
将血细胞计数器移动到下一组方块(16个方块)并继续计数，直到所有4组方块(每组16个方块)都计数完毕。
计算活细胞的数量
计算每组正方形(16个正方形)中细胞计数的平均值，并记录它们的值以计算细胞浓度。
取4组16个方块的活细胞平均数乘以10000 ，得到每毫升的细胞数。
当加入锥虫蓝时，乘以5以校正1:5的稀释度。最终值是原始细胞悬液中活细胞的数量/mL 。示例:
如果每16个方块的细胞数为50、40、45、52 ，则平均细胞数为:
(50 + 40 + 45 +52) 4 = 46.75
46.75 x 10000 (104) = 467500
原始细胞悬液中467500×5 = 2337500活细胞/毫升
06计算细胞活力。
将活细胞计数和死细胞计数相加得到总细胞计数。
通过用活细胞数除以总细胞数来计算活力百分比。
示例:
活细胞计数:2337500细胞/毫升
死亡细胞数:50 ， 000个细胞/毫升
237500+50000 = 2387500个单元格
237500 2387500 = 97.9%生命力
-结束-
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