琼脂糖凝胶电泳的原理是什么?

琼脂糖凝胶电泳的原理是什么?

琼脂糖凝胶电泳的原理是什么?

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琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为介质,对不同大小的DNA 或 RNA 实现分离的一种电泳方法 。琼脂糖是一种多糖,具有亲水性,但是不带电荷 。
【琼脂糖凝胶电泳的原理是什么?】使得 DNA 在碱性条件下使其带负电荷(pH8.0 的缓冲液),在电流作用下,以琼脂糖凝胶为介质,由负极向正极移动,根据不同的 DNA 分子片段的大小和形状不同,在电场中泳动的速率也不相同,同时在样品中加入染料能够和DNA 分子间形成络合物,经过紫外照射,可以看到 DNA 的位置,从而达到分离、鉴定的目的 。
琼脂糖凝胶电泳注意事项底板一定要用胶带封紧,否则灌胶时凝胶会漏出 。可以在灌胶时先倒少量凝胶在交界处,利用凝固的凝胶将其封紧 。梳子一定不能插到底部,应距离底部1-2mm,否则拔梳子时容易弄破凝胶,导致漏胶,加热时应注意不要让琼脂糖沸腾得太厉害,稍稍沸腾至溶液清凉,即其全部溶解即可,过度沸腾会导致凝胶实际浓度的提高 。将凝胶放入电泳槽时要注意极性,不要正负极颠倒 。
要注意撕去两端的封带,凝胶的浓度与待分离的DNA的大小有关 。一般浓度为1%,低浓度的胶特别易碎,要注意 。
琼脂糖凝胶电泳的原理是什么?
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琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力 。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动 。
在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即分子本身的大小和构型是主要的影响因素 。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比 。做琼脂糖凝胶电泳的注意事项:1、Marker的选择Marker的选择要适中,Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的,这样对目标片段大小的估计才比较准确 。如果marker太大就可能跑不开,挤到一起,起不到marker的作用 。2、煮胶要完全,胶要摇匀注意煮胶完全,不然有小颗粒会影响跑胶结果 。
如果胶没有摇匀,跑胶的时候,相同的DNA的速度就不会相同,这样会出现弥散条带 。
琼脂糖凝胶电泳的原理 琼脂糖凝胶电泳的原理介绍
琼脂糖凝胶电泳的原理是什么?

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1、琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力 。2、但由于其孔径相比于蛋白质太大,对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道,现广泛应用于核酸的研究中 。
3、琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法 。
其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用 。4、核酸是两性电解质,其等电点为pH2-2.5,在常规的电泳缓冲液中(pH约8.5),核酸分子带负电荷,在电场中向正极移动 。核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时,具有电荷效应和分子筛效应,但主要为分子筛效应 。5、线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中移动,因而迁移得越慢 。
琼脂糖凝胶电泳的原理
琼脂糖凝胶电泳的原理是什么?

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琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法 。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用 。
琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力 。
但由于其孔径相比于蛋白质太大,对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道,现广泛应用于核酸的研究中 。蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,根据这个原理可将其分开 。电泳缓冲液的pH在6~9之间,离子强度0.02~0.05为最适 。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物 。