离心研磨机怎么保养a)一化学机械离心研磨机上,其具有一研磨主轴、可拆装地设置于该研磨主轴上一研磨具,其该研磨载具具有数个抽气孔、一可拆装导环以及一载具膜,用激光预先加工所述载具膜上与该抽气孔对应数个孔洞;
(b)当该化学机械离心研磨机需预防保养时,将该研磨载具从该研磨主轴上拆下;
(c)将该导环从该研磨载具拆下且去除原有载具膜后,对该研磨载具进行清洁处理;
(d)将新载具膜与对孔板对准,其该对孔板上具有与该抽气孔对应数个第一销孔,且每一第一销孔上设有一固定销,当该载具膜与该对孔板对准时,每一固定销穿过该孔洞;
(e)将该载具膜与该对孔板一起放置该研磨载具上,使每一固定销依序穿过对应孔洞、抽气孔;
(f)将该载具膜粘贴该研磨载具上,且移去该对孔板;
(g)将该导环安装至该研磨载具后,将该研磨载具安装至该研磨主轴上 。
高速离心研磨机(立式离心机)的特点是什么?离心机离心分离的几种方法及特点
制备型超高速离心机的几种分离方法:
A.差速离心:逐次增加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份 。
差速离心是一种最常用的方法 。在这种方法中,离心管在开始时装满了均一的样品溶液 。通过在一定速度下一定时间的离心后,就可得到两个部份:沉淀和上清液 。
通常在第一次离心时把大部分不需要的大粒子沉降去掉 。这时所需的组份大部分仍留在上清液中 。然后将收集到的上清液以更高速度离心,把所需的粒子沉积下来 。离心的时间要选择得当,使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中 。对于得到的沉淀和上清液可以进行进一步的离心,直到达到所需要的分离纯度为止 。
差速离心的特点是操作简单,但分离纯度不高 。
B.密度梯度离心法:可以同时使样品中几个或全部组份分离,具有很好的分辨率 。
(1)速率区带法(rate zonal):
根据样品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S) 。大致步骤如下:
在离心管中装入密度梯度溶液,溶液的密度从离心管顶部至底部逐渐增加(正梯度) 。
将所需分离的样品小心地加至密度梯度溶液的顶部 。样品在梯度溶液表面形成一负梯度 。
由于不同大小的粒子在离心力作用下,在梯度中移动的速度不一样,所以经过离心后会形成几条分开的样品区带 。
注意:样品粒子的密度必须大于梯度液注中任一点的密度 。离心过程必须在区带到达管子底部前停止 。
(2)等密度离心法(isopycnic):
根据粒子的不同密度来分离 。离心过程中,粒子会移至与它本身密度相同的地方形成区带 。
密度样度的选择要使梯度的范围包括所有待分离粒子的密度 。样品可以在密度梯度液粒上面或均匀分布在密度梯度中 。经离心后,样品粒子达到它们的平衡点 。
注意:平衡后粒子的分离完全由其密度决定,与时间无关,此时再改变离心转速,只能改变区带的相对位置 。
密度梯度分析法
(1)梯度介质性质与选择:
A、应具备的性质:
梯度物质的选择原则是满足分离方法的基本要求,一个理想的密度材料标准它应是:
所形成的溶液密度应包括所需要的密度范围 。
具有某些性质,如折射率,据此可测定它的浓度 。
所形成的溶液粘度低 。
不损伤所分离的样品 。
离心分离后容易除去 。
不妨碍分离积分的分析 。
B、常用介质种类:
表一、常用梯度材料在20℃密度
B.梯度介质应用范围:
表二、等密度梯度介质的应用
表三、各种大分子在蔗糖梯度液中的大约密度
(2)、梯度溶液的准备:
计算,稀释
(3)梯度形状
梯度形状分:线型、等速型、阶梯型、平坦型、陡峭型指数梯度 。
梯度形状对于分离是否成功非常重要:
最常用的是线型梯度,适用于分离蛋白质、酶、激素、核糖体亚基和一些植物病毒;等速型适用于分离脂蛋白和一些需上浮分离样品;不连续或阶梯型梯度最适用于分离整细胞、亚细胞组分以及纯化一些哺乳类动物病毒或昆虫病毒 。等速梯度以及长液柱可增进分离能力,适用于分离核糖体亚基、多核糖体及植物病毒 。
B.梯度柱制备:
梯度液柱可以用手工或梯度仪制备
半注法:
为缩减离心时间,或分离样品较少可用半注法:下半管铺置梯度介质,中间加样品,上面铺Buffer或液体石腊油 。
(4)加样方法与加样量:
将样品加到梯度液柱上,针尖和离心管成45-60°角度,慢慢地将样品沿管壁流到液面上去,对于DNA一类易断的脆弱样品,应该用孔径较大的移液管代替针头,以避免剪切力对样品的切割作用 。样品浓度是梯度柱最小密度的1/10(W/W) 。
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