原代细胞？难转染？Nature Protocols教你快速细胞基因稳转与观察在Nature Protocols最新的文章中

大程最喜欢汤富酬老师的一句经典名言，做生命科学需要对新技术有格外的敏感力，在Nature Protocols最新的文章中，一项新的稳定转染T细胞的技术，立即吸引了大程的注意，我们知道原代细胞非常难于遗传操作，然而在这篇文章中，科学家们提出了新的方法，可以更加快速更加高效的逆转录病毒感染富集以及体内观察。我相信这项技术对于很多小伙伴们也很重要，因此特异加上我的一些解读分享给大家。

首先最重要的是哪篇文章：

具体来说，这篇文章干了一件什么事情那？

通过逆转录病毒（RV）把目的基因导入细胞中，是非常棒的手段，在众所周知的CarT等技术中大放异彩。然而体内长时间（数周至数月）的转导T细胞的体内监测仍然是具有挑战性的，因为在没有浓缩的情况下转移的转导T细胞随时间推移的频率低，性能差。传统方法通常在转导后需要额外的过夜体外培养。此外，通过分选富集的体外产生的CD8 + T细胞通常具有降低的活力，使得难以监测细胞在体内的命运。在这里，科学家们描述了一种优化的小鼠CD8 + T细胞RV转导方案，其使用简单且快速的Percoll密度离心来富集RV-敏感的活化的CD8 + T细胞。 Percoll密度离心简单，可以在转导当天进行，需要最少的时间，降低试剂成本，提高细胞回收率（高达60％），以及RV转导细胞的频率。科学家已经使用这个方案来评估RV转导后CD8 + T细胞的长期稳定性，比较转染的T细胞与表达六种常用RV报告基因中的每一种的逆转录病毒的耐久性。总体来说，这项新技术，允许RV转导的T细胞的长期体内评估。从T细胞分离到RV转导的整个过程需要2 d，活化的T细胞的富集可以在1 h内完成。

光看字了，让我们来看看流程图：

我们现在光看到他们文章厉害了，那么他们的技术厉害在什么地方？

他们发现了哪些细胞更易于逆转录病毒感染。

他们发现形态上更Blasting的细胞更易于感染，因此通过fACS可以快速富集易于感染的细胞。

手把手的详细步骤：

具体详见文章~~

欢迎大家关注！