这样做 WB 半定量,内参丢了你还不知道?( 三 )
从培养的细胞 / 组织中提取全蛋白,也叫总蛋白,是蛋白质分析和纯化最常用的方法之一。理想的蛋白提取方案应该能够从样品中提取所有蛋白质而不产生偏差。
然而,由于样品之间,蛋白质之间都具有很大的差异,使得总蛋白提取时同时释放和溶解所有蛋白,变得极为困难。例如:蛋白质与膜整合或与其他蛋白质或核酸形成复合体时,都将极大阻碍蛋白提取的效率。因此,与体内情况相比,提取的蛋白质可能或多或少的失真。因此,内参的相对量也可能被改变。
读而思
我们使用 RIPA 裂解液提取蛋白后通常产生 RIPA 可溶性组分和 RIPA 不可溶性组分,RIPA 不可溶组分通常会被丢弃掉,扔掉的不可溶组分中有没有内参呢?我们的目的蛋白又有哪些变化呢?我们解析了如下文献。
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