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免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

实验材料

1.

2. 试剂、试剂盒

多聚甲醛  70% 甲醇  丙酮  PBS  Triton  BSA  DAPI 染液  DABCO  Tris 甘油

3. 仪器、耗材

玻片

实验步骤

第一天

1.

在培养板中将已爬好细胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次，每次 3 min；

2.

用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min， PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min；

3.

0.5%Triton X-100( PBS 配制 ) 室温通透 20 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

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第二天

1. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中 20～37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗切片 3 次，每次 3 min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

2. 复染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，对标本进行染核，PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI；

常见问题及解答

1. 半贴壁细胞做免疫荧光，该怎么处理呢？

2. 悬浮细胞怎么做呢？

3. 见不到荧光，是什么原因？

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