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作为 DNA 转染试剂的第二代脂质体产品，对 HEK293 相关细胞和其它哺乳动物细胞， LipoD293?（Ver. II）转染试剂提供了极高的转染效率，并且细胞毒性低。通过加入转染增强肽的方式，使基因转染效率提高了 3～4 倍。用 1.0 ml 转染试剂，能在 24 孔板中足够完成 666 次转染，在 6 孔板中足够完成 333 次转染。

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LipoD293? 转染试剂（升级版）增强转染的原理

产品特点

储存条件

40 ℃ 储存。若储藏合适，产品的稳定性能保持 12 个月以上。

与市场品牌产品转染效率比较

对 HepG2 细胞转染效率的比较

右图：使用以上转染试剂将 GFP 的 cDNA（pEGFP-N3）按照生产商的提供的转染步骤转染到 HepG2 细胞（在胶原预处理的培养皿中培养）。在转染 48 小时之后，用流式细胞仪检测 GFP 阳性细胞（%）和荧光强度。

左图：血清和抗生素存在的条件下能提高 LipoD293 试剂（升级版）对在 HepG2 细胞的转染效率。通过三种不同的条件下转染 HepG2 细胞（生长在胶原处理的培养皿上）---无血清和抗生素，10% 血清和抗生素的存在，转染 5 小时后换液和不换液。

对 CHO 细胞转染效率的比较

右图：使用以上转染试剂将编码荧光素酶蛋白的 cDNA（phRL-CMV）和绿色荧光蛋白 GFP 的 cDNA 按照生产商的提供的转染步骤分别转染到 CHO 细胞。在转染 24 小时后，荧光素酶的活性使用 Beckman 公司的化学发光监测器测定；GFP 阳性细胞率使用 BD 公司的 FACS 检测。

左图：LipoD293 试剂（升级版）和 Lipofecatmine 2000（L2K）, TransIT 以及 Fugene 6 的价格比较（美元/1000 微升）。所有的价格是从生产制造商的网站上收集的。

在难转染细胞（原代大鼠动脉平滑肌细胞）转染效率的比较

图片由芝加哥大学肺和重症护理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供

制备大鼠的动脉平滑肌原代细胞并用使用 LipoD293?试剂（左图）和 Lipofecatmine 2000（L2K, 右图）分别将 GFP 的 cDNA（pEGFP-N3）按照生产制造商的转染操作步转染至该细胞。转染 24 小时后，用尼康 Eclipse 2000 荧光显微镜检测 GFP 荧光，以此来评价转染效率。

对难转染细胞 LNCap 细胞转染效率的比较

图片由罗斯威尔公园癌症研究所（Roswell Cancer Institute）的 Lyn Gao 博士友情提供

LNCap 细胞的培养和传代严格由 ATCC 建议的操作步骤进行，与 pBabe-hygro-SSeCKs（1.5ug）和 pEGFP-N3（1:1，共 1.0 微克）共转染（6 孔板中每孔的量），并用 LipoD293? 试剂（左图）和 Fugene HD（右图）分别按照生产制造商的科学实验步骤进行转染。转染 24 小时后，用尼康 Eclipse 2000 荧光显微镜检测 GFP 荧光，以此来评价转染效率。

对难转染细胞像 HepG2 和 SaoS-2 上出色的转染效率

在血清和抗生素的存在下，HepG2 和 SaoS-2 细胞用 pEGFP-N3 和 pSV-β-半乳糖苷酶 DNAs 分别转染达到 95% 的细胞融合。转染 48 小时后，分别通过 Zeiss 510 激光共聚焦显微镜和 β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测效率。

对 HEK293 细胞转染效率的比较

用 LipoD293? 体外 DNA 转染试剂（Ver. II）（上图）和受欢迎的品牌产品 Invitrogen 公司的 293fectin?（下图）转染 pEGFP-C1 质粒到 HEK293 细胞中。转染 24 小时后，细胞的尼康 Eclipse 荧光显微镜 DIC 成像图（左侧）和荧光成像图（右侧）。 

对悬浮 HEK293F 产生蛋白质效率的比较

30 毫升的 293F 细胞分别使用 LipoD293?试剂、293fectin、Xfect 和 Fugene 6 等转染试剂按照生产商的标准转染步骤将 pEGFP-6xHis 质粒导入细胞表达，用量为 LipoD293? 试剂，20 微克，所有其他三种转染试剂均使用 30 微克质粒 DNA。

转染 48 小时后，使用尼康荧光显微镜 GFP 荧光进行成像（左侧四幅图），A：LipoD293； B：293fectin；C：Xfect 和 D：Fugene 6.  带有 6xHis 标记的 GFP 荧光蛋白使用 Ni-NTA 亲和柱技术实现分离。5 微升洗脱液载入 SDS-PAGE 凝胶电泳分离并进行 Coomassie 亮蓝染色（右上图 E），道 1 为 LipoD293293、道 2 为标准蛋白分子、道 3 为 Xfect、道 4 为 293fectin 和道 5 为 Fugene 6。这四种转染试剂产生蛋白质的效率被进一步定量（见右下图 F）。 

产生慢病毒的比较

通过 LipoD293? 试剂（升级版）和 Lipofectamine LTX（LTX）试剂将三个 cDNAs 共转染进 293T 细胞。一个 GFP 载体，pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用来测定慢病毒的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 细胞，其次是分别添加不同量的慢定都上清液，1 微升（上图）和 10 微升（下图）。

5 天后，细胞通过流式细胞仪检测。右上角的数字表明转导的细胞的百分比来测定慢病毒的滴度。由 LipoD293? and LTX 产生的慢病毒的滴度被量化，分为是 8x10^6 和 3x10^6 tu/ml 。

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作者：思科生物

图片来源：思科生物

题图来源：shutterstock.com 正版图库

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