牛胰岛素|利用液质检测生物合成人胰岛素牛胰岛素

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2021年是胰岛素发现100周年。胰岛素是治疗糖尿病中的重要组成部分，是胰腺的β-细胞合成的蛋白激素， 100年前，一组加拿大科学家首次发现并提纯了胰岛素，使一种致命的疾病首次得以攻克，其主要功能是控制动物体内的血糖浓度，在糖尿病治疗史上具有“里程碑”式的意义。
目前胰岛素鉴定方法有液相色谱-紫外吸收法、荧光法等，光学分析方法对化合物的鉴定强烈依赖于色谱的分离能力。近年来随着液相色谱质谱法得到了快速的发展，它弥补了光学法的不足。本文微源实验室经过查阅资料以胰岛素作为模型蛋白，尝试HPLC与ESI-TOF/MS联用鉴定胰岛素的方法，对2种商品化胰岛素注射液进行了快速的分离分析。
色谱质谱条件：

色谱柱	Agilent Zorbox-C18色谱柱（2.1mm×30mm ， 3.5μm）
流动相	1％醋酸水溶液/乙腈（60:40V/V）
流速	0.2mL/min
紫外检测波长	220nm

采用ESI正离子电离模式；干燥气流速：12L/min；干燥气温度：350℃；喷雾气压：0.278Mpa；毛细管电压：4500V；离子扫描范围：500-2500m/z
精确称量5mg牛胰岛素标准品，置于50mL超纯水加入0.2%醋酸溶解完成，然后配制成0.1g/L的牛胰岛素标准溶液。再精确量取精蛋白生物合成人胰岛素注射液及医用瓶装注射液各1mL ，分别用超纯水稀释至10mL再加入0.1%醋酸溶解。将配制好的样品溶液置于冰箱低温冷藏备用，实验时将样品经0.45um微孔滤膜过滤进样。在选定的色谱质谱条件下，牛胰岛素标准品在C18微柱上的保留时间为0.99min 。
牛胰岛素标准品经C18微柱分离和经C8长柱分离的液相色谱图
精蛋白生物合成人胰岛素注射液及医用瓶装注射液经C18微柱和C8长柱分离的液相色谱图
【牛胰岛素|利用液质检测生物合成人胰岛素】商品化胰岛素注射液是多种成分的混合物， C18微柱能对混合物中各成分实现快速精蛋白生物合成人胰岛素注射液分离，此方法可以对其中的胰岛素进行最直观、准确的鉴定。