恒温PCR技术检测转基因有哪些优点?( 二 )


普通聚合酶链式反应(PCR)的优缺点
优点:
1)准确度较高
2)灵敏度高
3)价格低
缺点:
1)操作复杂需要一定的专业背景
2)电泳时使用的染料对人体有一定危害
3)只能检测一个指标
实时荧光定量PCR(qPCR)的优缺点
优点
1)灵敏度高
2)准确度高
3)高通量
4)可以实现实时监控
5)可以实现定量判断
缺点
1)价格高昂
2)操作复杂
3)配套产品少
4)维护费用高
恒温荧光PCR检测方法:
恒温PCR技术的特点可以概括为比PCR更准确、快速、易于实现 。因实现恒温扩增,特殊的引物设计,使得检测更准确;无变性、退火等环节,全过程均在进行DNA片段的复制,没有时间损耗,使检测更快速;无热循环需求,设备简单,更易于推广应用 。为PCR技术推广应用创造了全新的空间 。目前主流的实时恒温荧光PCR仪有广州迪澳生物Deou—308C恒温荧光检测仪、3M Molecular Detection System、Optigene Genie II 和 Genie III、Qiagen TuberScaner II、Envirologix DNAble等 。
转基因的检测方法比较目前常用的转基因检测方法有试纸条法、普通聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR、恒温荧光PCR、数字PCR
试纸条:简单、快速,但对于深加工食品不适用
普通聚合酶链式反应(PCR):准确度较高,灵敏度高,价格低,缺点是专业性要求高,电泳的染料对人体有害,只能检测一个指标
实时荧光定量PCR:灵敏度高、准确度高、高通量、可实时监控,可定量判断、自动化程度高,缺点是仪器价格高昂、操作复杂、配套产品少、维护费用高
恒温荧光PCR:灵敏度高、特异性强、快速还可实时监控,仪器性价比高,利于推广
数字PCR:准确度高、重现性好、可绝对定量、检测通量高、灵敏度好,但仪器价格昂贵
什么是转基因食品?转基因食品的转基因成分可以通过PCR快速检测,请简述PCR技术转基因食品指的是利用转基因生物技术(转基因生物技术是指在特定生物物种基因组导入外源基因并使其有效地表达相应产物的新型育种技术)获得的转基因生物品系,并以该转基因生物为直接食品或为原料加工生产的食品称为转基因食品 。

聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加 。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对 。这也是“微量证据”的威力之所在 。由1983年美国Mullis首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,意味着PCR技术的真正诞生 。到如今2013年,PCR已发展到第三代技术 。1976年,中国科学家钱嘉韵,发现了稳定的Taq DNA聚合酶,为PCR技术发展也做出了基础性贡献 。
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链 。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制 。
怎样检测转基因食品目前对转基因食品的检测按原理主要分为针对外源蛋白质和针对外源DNA两种鉴定技术 。
外源蛋白质的测定
即从蛋白质水平对转基因食品进行检测,实际应用中主要采用的是免疫学检测法,即Western杂交、酶联免疫吸附法(ELISA)和试纸条法 。免疫学检测法可以检测具有抗原性的蛋白质类表达产物的存在,它是通过抗原抗体特异反应来实现的 。
Western杂交 Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异蛋白质检测方法,具有很高的灵敏性,可以从植物细胞总蛋白中检测出50ng的特异蛋白 。Western杂交检测的关键是抗体的制备 。
酶联免疫吸附法 ELISA建立了固-液抗原抗体反应体系,并采用酶标记,抗体与抗原的结合通过酶反应来检测 。由于酶的放大作用,使测定的灵敏度极高,可检测出1pg的目标物,同时酶反应还具有很强的特异性 。它的检测原理和过程基本与Western杂交检测相似 。
试纸条法 此法是在最近15年发展起来的,之前主要用于医学领域 。与ELISA相似,这种测定方法是将特异的抗体交联到试纸条上和有颜色的物质上,当纸上抗体和特异抗原结合后,再和带有颜色的特异抗体进行反应,就形成了带有颜色的三明治结构,并且固定在试纸条上,如果没有抗原,则没有颜色 。因此整个操作相对简单一些 。目前市场上也出现了一些此类测试的试纸盒 。