2.2 实验药物化瘀通络汤是中山市中医院院内制剂（中山市中医院制剂室 ， 批号：20171201）；阳性对照药是步长脑心通胶囊（陕西 。

18、步长制药有限公司 ， 产品批号：1709171） 。
2.3 实验试剂10%水合氯醛（上海展云化工有限公司 ， 批号：141115） ， 碘伏 ， 70%乙醇 ， 生理盐水 ， 0.9%PBS ， 4%多聚甲醛溶液 ， TTC（MP Biomedicals,LLC, 批号：Q1130） ， IL-6免疫酶联试剂盒（华美CUSABIO ELISA ， 产品编号为：CSB-E04640r） 。
2.4 实验仪器自动程控烘箱（杭州卓驰仪器有限公司） ， 医用离心机（湖南湘仪实验仪器开发有限公司） ， 移液枪（德国sartorius产品 ， 10,100,200,1000L） ， 电子天平（常熟市双杰测试仪器厂） ， 酶标仪(Multiskan Mk3型 ， 赛默飞世尔（ 。

19、上海）仪器有限公司),Unique系列超纯水机(广州誉维生物科技仪器有限公司) 。
3 方法3.1 实验动物及其分组取120只SPF级健康SD大鼠 ， 雄性 ， 体重250g-350g ， 随机分为6组 ， 分别为假手术组、模型对照组、化瘀通络汤低剂量组、化瘀通络汤中剂量组、化瘀通络汤高剂量组 ， 阳性对照组（步长脑心通） ， 每组20只 。
各给药组给药剂量分别为 ， 化瘀通络汤低剂量组（7.65g/kg） ， 化瘀通络汤中剂量组（15.3g/kg） ， 化瘀通络汤高剂量组（30.6g/kg） ， 阳性对照组（0.864g/kg） ， 各组连续灌胃给药7d ， 给药量为1mL/100g 。
3.2 MCAO模型的建立给大鼠称重 ， 用10%水合氯醛（新鲜 。

20、配制 ， 麻醉效果最佳）经腹腔注射麻醉大鼠（0.35mL/100g） ， 用剃毛剪剃去大鼠颈部的鼠毛 ， 碘伏消毒 ， 从颈部正中切开皮肤 ， 钝性分离暴露右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉 ， 结扎颈外动脉、颈总动脉近心端 ， 夹闭颈内动脉 ， 用眼科剪在颈总动脉结扎的远心端剪一小口导入线栓 ， 松开颈内动脉夹 ， 栓线经颈总动脉进入颈内动脉 ， 遇到阻力即停止 ， 长度约为18mm ， 用缝合线系住栓线（防止栓线脱落 ， 导致造模失败） ， 缝合伤口 ， 在伤口放置浸润生理盐水的无菌纱布 ， 放回鼠笼 ， 用白炽灯进行照射 ， 保持大鼠体温在（370.5） ， 2h后拔掉栓线 ， 灌注24h 。
假手术组仅切开皮肤 ， 钝性分离暴露颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉即缝合 。
3.3 神经功 。

21、能缺损评分各组大鼠灌胃给药7d后进行造模 ， 造模24h后对各组大鼠进行神经功能缺损评分 。
参照 Longa16 法进行神经功能缺损评分：0 分：无神经功能缺损症状；1 分：轻微神经功能缺损 ， 左侧前肢不能伸展；2 分：中度局灶性神经功能缺损 ， 行走时向左侧转圈；3 分：重度局灶性神经功能缺损 ， 行走时向左侧倾倒；4 分：不能行走 ， 或者意识丧失 。
3.4 脑梗死体积的测定脑缺血再灌注24h后 ， 用新鲜配制的10%水合氯醛经腹腔注射麻醉大鼠（0.35mL/100g） ， 打开腹腔 ， 剪去右心耳 ， 0.9%PBS灌注至心脏和肝脏发白 ， 断头取脑 ， 放入-20冰箱速冻10min ， 取出后连续冠状切片6片 ， 片厚2mm ， 将脑片放入盛 。

22、有1%TTC溶液中 ， 放入自动程控烘箱37恒温孵育30min（不能见光 ， 在暗光环境下进行）,每隔15min用镊子翻动脑片一次 ， 脑梗死组织为白色 ， 正常脑组织为红色 。
用数码相机进行拍照 ， 使用图像处理软件分析每张脑片的梗死面积百分比,脑梗死体积百分比=(正常侧大脑半球体积-梗死侧非梗死区大脑半球的体积)/正常侧大脑半球体积%= (S1+S2+Sn)H-(S1+S2+Sn)H/(S1+S2+Sn)H%,Sn表示每片正常脑组织面积 ， Sn表示梗死侧非梗死区每片脑组织面积 ， H表示每片厚度17 。
3.5 脑组织病理制片的观察在实验结束后 ， 剖取脑组织 ， 经4%多聚甲醛溶液固定 ， 常规取材 ， 脱水 ， 石蜡包埋 ， 制片（4m厚） 。

23、 ， HE染色 ， 光学显微镜观察并拍照 。
3.6 大鼠腹主动脉采血测血清中IL-6的含量将大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.35mL/100g）麻醉 ， 仰卧固定在手术台上 ， 酒精消毒后用手术剪沿着腹正中线剪开腹腔 ， 准备采血时 ， 先用棉花把肠管推开 ， 将腹主动脉完全暴露 ， 在腹主动脉分叉处向心端1-3mm处为最佳穿刺点 ， 右手持穿刺针 ， 针尖斜面朝下 ， 入针角度为25-30 ， 朝向心端方向刺入 ， 深度为5mm左右为宜 ， 针刺进血管尽量不要抖动 ， 缓慢抽血（血液要冰冻保存 ， 温度保持在0摄氏度 ， 防止血液凝固） 。
离心分离血液 ， 取上清液（即血清） ， 用ELISA法测定血清中IL-6的含量 。
3.7 统计学方法采用 SPSS 17.0软件对实 。

24、验数据进行分析处理 ， 计量资料以（）表示 ， 采用单因素方差分析法 ， 以P0.05表示差异具有统计学意义 。

稿源：(未知)

【傻大方】网址：/a/2021/0925/0024178351.html

标题：化瘀通络汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究|化瘀通络汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究中药学专业( 三 )